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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】小白请教，PCR有什么窍门吗？
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李彦辉

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-01-28 12:38:49:
另外再给你个小建议，你刚开始做，体系大一点，感觉稍微稳定了，把体系降低到10ul，如果10ul体系你做的很稳定，每次跑都一样，那恭喜你，PCR培训成功。

这是个办法
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11楼2010-01-28 12:45:04
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hutingting at 2010-01-28 12:44:05:

不一定是你PCR做的有问题，有可能是跑胶的时候出来问题，看看配胶过程

那请问配胶过程中什么因素会导致实验不成功呢？
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12楼2010-01-29 09:47:15
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-01-28 12:38:49:
另外再给你个小建议，你刚开始做，体系大一点，感觉稍微稳定了，把体系降低到10ul，如果10ul体系你做的很稳定，每次跑都一样，那恭喜你，PCR培训成功。

请问大体系是指50ul 左右的吗？
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13楼2010-01-29 09:50:57
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nankou2008

铁杆木虫 (著名写手)

肥南瓜
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
50ul体系很大了， 25，20的试试就行了
另外配完反应体系  轻微离心混匀下
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湖深而静溪浅而鸣
14楼2010-01-29 10:22:22
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guanni1011

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的模板是一样的吗？
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15楼2010-02-04 11:15:19
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by guanni1011 at 2010-02-04 11:15:19:
你用的模板是一样的吗？

一摸一样的引物
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16楼2010-02-07 19:59:39
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
多做吧.这个是靠手法的.
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17楼2010-02-08 10:08:53
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cyjwx123

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
司马诸葛(金币+1): 2010-03-04 20:37
每次都是这样的结果吗？还是偶尔一次？我觉得要检查自己是否哪个环节出错就是做一个平行实验，如果结果和上次一样的话，那么就把Mg2+，dNTP，还有Buffer都换下，最好酶也重新换下再做一次看，注意各个东西加入的顺序，一般是这样的顺序：先ddw，再加Taq酶的Buffer，再加入dNTP，forward-primer和reverse-primer，最后要迅速的加入Taq酶。体系配好之后要速度进行PCR扩增。
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看的开才是真本事~
18楼2010-02-08 13:53:05
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松上云雀

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
极有可能是你加完体系后没有混匀，最好是加完体系短暂离心一下。再试一次看看吧。
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19楼2010-02-08 14:24:03
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yunwalking

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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Originally posted by 雨中蜗牛 at 2010-01-27 21:31:04:
有可能你的模板没加够量，也有可能是酶没加上，一回生二回熟，多做就好了

"酶没加上“会有引物二聚体？  也是新手吧？
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爱我中华~
20楼2010-02-09 11:14:40
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