24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 869  |  回复: 13
当前主题已经存档。

yangym1123

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】克隆出现的奇怪问题,请教各位大虾!

最近有个同学做克隆时出现下面的问题:用LATaq酶进行PCR扩增得到一条2.0K左右的条带,连接进入pMD18-TVector,挑取单克隆进行菌落PCR验证(普通Taq酶),验证只有100多bp左右的条带,用LATaq酶进行验证得到目的条带和一条100 多bp条带,提取质粒后酶切也得到了目的条带2.0K左右的带(看到目的条带和载体带),送菌液测序,测序结果非常奇怪,测出来是100多bp的条带,为什么酶切验证过有目的条带2.0的片段,测序却测出来是100多bp呢?请教各位大虾,谢谢啦!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grxx_wj


yangym1123(金币+1):谢谢参与
你没跟测序的说你要2K的吗 人家以为 你要100的呢 凡是连上去的 都能测 放心吧
2楼2010-01-27 09:32:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhwang

木虫 (小有名气)


yangym1123(金币+1):谢谢参与
测反了吧
3楼2010-01-27 13:07:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangym1123

木虫 (小有名气)

没有测反,测序要求也是说是2.0K的,但是测序结果就是100bp左右!
4楼2010-01-27 13:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

木虫 (著名写手)


yangym1123(金币+1):谢谢参与
基因是不是有特殊结构?
闹太套
5楼2010-01-27 13:36:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)


yangym1123(金币+1):谢谢参与
测序公司肯定是用普通酶做的反应,所以你给他们提供点酶,重新测
6楼2010-01-27 13:59:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjwang

木虫 (正式写手)


yangym1123(金币+1):谢谢参与
100BP是目的基因序列吗?正反向测呢?
7楼2010-01-28 15:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangym1123(金币+1):谢谢参与
顶一下!
8楼2010-01-29 18:00:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mayerpaco

铁虫 (小有名气)


yangym1123(金币+1):谢谢参与
还真是怪异呢……
9楼2010-02-02 16:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜舞龙

至尊木虫 (知名作家)


yangym1123(金币+1):谢谢参与
yangym1123(金币+1):谢谢! 2010-02-04 09:21
酶切是用引物上带的酶切位点吗?
因为pMD18大概也是2KB多,如果酶切不完全,环状的质粒和切开的线状质粒也会明显分为两条带,切成线状的pMD18也会出现在2KB多的位置上。这可能说连进去的不是目的片段,只是100多的片段。
但是LATaq酶进行验证却能得到目的条带,这就不好说了,和上边的结论又矛盾了。
又或者是单克隆没挑好?有杂菌存在。既有连进去目的片段的菌落,又有连上100BP杂带的菌落?
10楼2010-02-02 16:52:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangym1123 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +38 xaw. 2026-04-11 39/1950 2026-04-14 13:04 by wanganpin
[考研] 一志愿085502,267分求调剂 +18 再忙也要吃饭啊 2026-04-08 19/950 2026-04-13 21:27 by wunaiy88
[考研] B区0809 ,数一英一,290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +9 求上岸的小王 2026-04-10 9/450 2026-04-13 16:08 by jiangguiquan11
[考研] 生物学调剂 +11 小冉要努力 2026-04-10 13/650 2026-04-13 11:46 by 电化学及催化
[考研] 考研二轮调剂 +10 故人?? 2026-04-09 10/500 2026-04-13 09:55 by szhize
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
[考研] 322求调剂 +6 123安康 2026-04-12 13/650 2026-04-12 15:51 by 123安康
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 085410-273求调剂 +6 X1999 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:32 by Delta2012
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 266求调剂 +29 阳阳哇塞 2026-04-07 29/1450 2026-04-10 16:20 by 高维春
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
[考研] 388求调剂 +6 四川王涛 2026-04-07 8/400 2026-04-08 00:17 by JourneyLucky
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
信息提示
请填处理意见