应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】克隆出现的奇怪问题，请教各位大虾！
141/2返回列表12下一页
查看: 860  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

yangym1123

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】克隆出现的奇怪问题，请教各位大虾！

最近有个同学做克隆时出现下面的问题：用LATaq酶进行PCR扩增得到一条2.0K左右的条带，连接进入pMD18-TVector，挑取单克隆进行菌落PCR验证（普通Taq酶），验证只有100多bp左右的条带，用LATaq酶进行验证得到目的条带和一条100 多bp条带，提取质粒后酶切也得到了目的条带2.0K左右的带（看到目的条带和载体带），送菌液测序，测序结果非常奇怪，测出来是100多bp的条带，为什么酶切验证过有目的条带2.0的片段，测序却测出来是100多bp呢？请教各位大虾，谢谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-27 09:03:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grxx_wj

★
yangym1123(金币+1):谢谢参与
你没跟测序的说你要2K的吗 人家以为 你要100的呢 凡是连上去的 都能测 放心吧
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-01-27 09:32:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhwang

木虫 (小有名气)
★
yangym1123(金币+1):谢谢参与
测反了吧
回复此楼
3楼2010-01-27 13:07:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangym1123

木虫 (小有名气)
没有测反，测序要求也是说是2.0K的，但是测序结果就是100bp左右！
赞一下 回复此楼
4楼2010-01-27 13:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biogefart

木虫 (著名写手)
★
yangym1123(金币+1):谢谢参与
基因是不是有特殊结构？
赞一下(1人) 回复此楼
闹太套
5楼2010-01-27 13:36:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
yangym1123(金币+1):谢谢参与
测序公司肯定是用普通酶做的反应，所以你给他们提供点酶，重新测
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-01-27 13:59:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjwang

木虫 (正式写手)
★
yangym1123(金币+1):谢谢参与
100BP是目的基因序列吗？正反向测呢？
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-01-28 15:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yinzhiminghao
★
yangym1123(金币+1):谢谢参与
顶一下！
8楼2010-01-29 18:00:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mayerpaco

铁虫 (小有名气)
★
yangym1123(金币+1):谢谢参与
还真是怪异呢……
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-02-02 16:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜舞龙

至尊木虫 (知名作家)
★
yangym1123(金币+1):谢谢参与
yangym1123(金币+1):谢谢！ 2010-02-04 09:21
酶切是用引物上带的酶切位点吗？
因为pMD18大概也是2KB多，如果酶切不完全，环状的质粒和切开的线状质粒也会明显分为两条带，切成线状的pMD18也会出现在2KB多的位置上。这可能说连进去的不是目的片段，只是100多的片段。
但是LATaq酶进行验证却能得到目的条带，这就不好说了，和上边的结论又矛盾了。
又或者是单克隆没挑好？有杂菌存在。既有连进去目的片段的菌落，又有连上100BP杂带的菌落？
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-02-02 16:52:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangym1123 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +8 李木子啊哈哈 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:55 by 李木子啊哈哈
[考研] 复试调剂 +14 积极向上； 2026-04-10 16/800 2026-04-12 20:02 by gruyclewee
[考研] 277求调剂 +22 倪建设 2026-04-06 22/1100 2026-04-12 18:18 by 学zh
[考研] 电子信息270求调剂 +18 terminal469 2026-04-07 18/900 2026-04-12 16:23 by ajpv风雷
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 085400 328分 求调剂 +10 喂你一个大橙子 2026-04-09 14/700 2026-04-11 19:53 by lqspecial
[考研] 生物学调剂 +8 小冉要努力 2026-04-10 9/450 2026-04-11 10:22 by wwj2530616
[考研] 0854调剂 +4 长弓傲 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:18 by 猪会飞
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +11 LZH（等待调剂中 2026-04-10 11/550 2026-04-11 08:39 by zhq0425
[考研] 085506-求调剂-285分 +3 雷欧飞踢 2026-04-08 3/150 2026-04-11 08:37 by zhq0425
[考研] 368求调剂 +3 17385968172 2026-04-10 3/150 2026-04-10 20:12 by 电子奥德彪
[考研] 085404 298分求调剂 +10 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 11/550 2026-04-10 16:44 by wangy0907
[考研] 285求调剂 +9 AZMK 2026-04-07 11/550 2026-04-10 15:24 by AZMK
[考研] 机械还有还有名额吗？太难了 +6 笑笑袁 2026-04-10 6/300 2026-04-10 11:54 by 高维春
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9，326分 +7 刘墨墨 2026-04-06 7/350 2026-04-10 08:11 by kangsm
[考研] 1U盾记得记得就 +9 sanjin020722 2026-04-08 10/500 2026-04-09 14:11 by 诗与自由
[考研] 270求调剂 +3 031127 2026-04-06 4/200 2026-04-08 21:00 by 逆水乘风
[考研] 一志愿哈工大，初试329，求环境科学与工程调剂！ +11 余未辛 2026-04-06 11/550 2026-04-08 15:21 by screening
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭