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luckyyan

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】Tm值高于72度怎么办?

小弟最近要扩段基因,但是退火温度软件给出的是75度左右。请各位高手指教一下该怎么办。由于必须从该位点起始,所以换引物不太可行。先谢过了~~~~
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松上云雀

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般软件计算出的Tm是过高的,可以降低5-10摄氏度。另外可以做梯度试一下,祝你成功吧!
11楼2010-02-07 15:43:32
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

引物长度是多少啊?
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
2楼2010-01-23 22:24:38
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towindflower

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 1-24 00:31
其实你是可以不从你设计的实验的ATG位点开始PCR的,因为你是从CDNA扩增的完全可以从Cdna的序列开始设计,因为前面没有没有ATG应对蛋白表达没有影响,你的TM值太高,扩增会有问题,建议做温度梯度,或者用专门的高GC PCR buffer。
3楼2010-01-23 22:28:27
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biogefart

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 1-24 00:31
生物学科是实验学科,做完了如果不行再找原因吧,我们的引物80度的Tm用53度都扩出来过
闹太套
4楼2010-01-23 23:08:13
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