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[交流]
【求助/交流】弱问一下农杆菌转化操作的一些细节问题
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新手，实验室也没有人做过，所以上来请教 请问dmso配利福平的时候需要过滤除菌吗 加了利福平抗性的平板或者试管是要避光的吗？避光的要求严格吗？ 我的gv3101感受态是利福平和卡那抗性的，想转化的质粒也是卡那抗性的，这样转化合适吗？阳性克隆的确定是不是只能用pcr检测？但是我担心即使有阳性克隆，在传代的过程中转化的质粒会不会丢失呢？加两倍的卡那能解决问题吗？ 谢谢了 |
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fungixx
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jcjcj(金币+2):谢谢啊 1-23 23:22
jcjcj(金币+2):谢谢啊 1-23 23:22
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不会的，除非他给你是转化了的：Strain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin, 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV3101 is sensitive to kanamycin (or chloramphenicol), so is a good strain for use with binary vectors that confer kan resistance (or chloramphenicol resistance) in bacteria (e.g. transformed cells will be Gent, rif and Kan resistant). GV3101 carries a disarmed Ti plasmid that possesses the vir genes needed for T-DNA transfer, but has no functional T-DNA region of its own. 我没太在意利福平是否需要避光，不过也没有出现什么问题，可能应该吧，毕竟包装瓶都是棕色的 |
8楼2010-01-23 13:35:09
pengl001
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2楼2010-01-23 04:26:03
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