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jcjcj

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】弱问一下农杆菌转化操作的一些细节问题

新手,实验室也没有人做过,所以上来请教
请问dmso配利福平的时候需要过滤除菌吗
加了利福平抗性的平板或者试管是要避光的吗?避光的要求严格吗?
我的gv3101感受态是利福平和卡那抗性的,想转化的质粒也是卡那抗性的,这样转化合适吗?阳性克隆的确定是不是只能用pcr检测?但是我担心即使有阳性克隆,在传代的过程中转化的质粒会不会丢失呢?加两倍的卡那能解决问题吗?
谢谢了
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gaozx123

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
jcjcj(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+2): 1-23 12:31
我们实验室有人做,刚咨询了一下,他们一直用75%乙醇配利福平,不过滤除菌。配75乙醇的超纯水灭菌,在超净台配制。没有问题。
卡纳也用超纯水配制,也没有过滤。同样是在超净台中配。
4楼2010-01-23 10:10:51
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pengl001

木虫 (小有名气)

★ ★
jcjcj(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 1-23 12:30
its better to use filter before you add 利福平
Yes,Ican!
2楼2010-01-23 04:26:03
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biogefart

木虫 (著名写手)

★ ★
jcjcj(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 1-23 12:31
楼上说的有理,最好滤一下抗生素,另外菌株和质粒都是kan抗性的话,质粒的抗性筛选功能就失去了,到时候长的满满板的估计得挑一个月克隆做PCR鉴定。
闹太套
3楼2010-01-23 08:21:06
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


jcjcj(金币+1):谢谢参与
DMSO配制利福平不用过滤;
没在意需不需要避光,应该不用吧;
GV3101的抗性是硫酸庆大跟利福平吧,没有kan抗性吧!,我也用这株菌;
阳性克隆可以用菌液pcr,提质粒酶切也行
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
5楼2010-01-23 12:53:56
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