应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于酶切回收问题
61/1返回列表
查看: 822  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

刘超_2009

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于酶切回收问题

做了次质粒（pET-28a）的双酶切（37°过夜），采用胶回收的步骤回收酶切质粒跑电泳发现没有任何条带（完整质粒跑胶时有较暗的条带）。问题出在哪儿了?怎么会连什么条带都没有呢？难道是没洗脱下来或是吸附柱损毁直接从废液中丢弃了？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-21 10:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gxsulong

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第一，可能你在做酶切的时候污染了核酸酶，降解掉了。
第二，回收的时候没洗脱下来，现在一般的试剂盒都要求洗脱液加热到65度。不过按照现在试剂盒的质量来说，第二个原因的可能性很少。
赞一下(1人) 回复此楼
霉菌
2楼2010-01-21 10:50:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujianxue

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是本来pcr产物条带就不亮，加上回收效率低，或者胶背景太亮，本身量少，所以酶切后无条带显示。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-01-21 11:00:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘超_2009

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujianxue at 2010-1-21 11:00:
可能是本来pcr产物条带就不亮，加上回收效率低，或者胶背景太亮，本身量少，所以酶切后无条带显示。

有道理，我再重复一遍吧，把质粒的量加大些做做
赞一下 回复此楼
4楼2010-01-21 11:45:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
量太少了吧，回收不到也正常，下次加大量吧，可以溶解在少一点的Eluent里
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-01-21 11:58:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用是什么样的试剂盒，有些试剂盒虽然标明可以回收10kb的片段，其实3-4kb的就已经超出回收极限了，回收载体推荐Fermentas或者omega的盒子。实在不行，乙醇沉淀下吧。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
6楼2010-01-21 12:19:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 刘超_2009 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭