| 查看: 506 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】求助荧光定量PCR实验问题
|
|||
|
我在做荧光定量PCR实验（样品中DNA的绝对定量，SYBR Green染料法）时，遇到了一个问题：有一个基因无法定量，无论是自己构建的标准质粒还是样品，经过10倍梯度稀释后，做荧光定量时，所有的样品Ct值都集中在15附近，无法得到标准曲线。理想情况下，样品的浓度减小，Ct值应该会增大；浓度每减小10倍，Ct值应增大3.2左右。我换用反应试剂，重新配置引物后还是如此。 后来发现我做荧光定量PCR的7个基因中（扩增产物均在250bp以下），只有这个基因选用的引物其中一条引物中有2个兼并碱基（其他6个基因的引物没有兼并碱基，都可以很好的扩增和定量）。我想问题是不是出在这里？做荧光定量PCR的引物是不是严格要求不能有兼并碱基？或是其他的原因导致无法定量？ 请高手为小弟答疑解惑，感激不尽！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有62人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
5楼2010-01-16 21:47:40
沙中清泉
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6633.7
- 散金: 24
- 帖子: 387
- 在线: 80.6小时
- 虫号: 610664
- 注册: 2008-09-23
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2010-01-16 14:47:55
ljwei_163
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1798.7
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 816
- 在线: 100.8小时
- 虫号: 574599
- 注册: 2008-06-16
- 性别: GG
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
3楼2010-01-16 16:13:55
4楼2010-01-16 21:07:04
