| 查看: 973 | 回复: 25 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
[交流]
【求助/交流】PCR不稳定。。。
|
|||
|
RT，我现在需要从质粒上P一段序列，刚开始摸索条件都还好好的，后面想大量PCR进行回收，结果就出事了，结果却没有条带。。 摸索条件的时候只做了1管，做大量的时候做8管，每台PCR仪放4管，结果就是没有条带，郁闷。。。。 已经做了好几次都是这样了，甚至都重新设计了引物，  做大量的时候，不管是每管分别加还是分装结果都是一样。。。我甚至都认好了PCR仪的孔。。。。快被这个不稳定的PCR搞崩溃了。。。各位有遇到这种情况吗？你们都怎么解决的啊？希望大家都来说说，谢谢。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有189人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
小虫子666
铁杆木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 6474.1
- 散金: 25
- 红花: 2
- 帖子: 756
- 在线: 126.4小时
- 虫号: 846035
- 注册: 2009-09-12
- 性别: GG
- 专业: 植物营养学
2楼2010-01-16 12:24:58
wangwei2008
木虫 (职业作家)
小木虫之移花宫主
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 4264.6
- 散金: 1
- 红花: 1
- 帖子: 4265
- 在线: 152.7小时
- 虫号: 495631
- 注册: 2008-01-15
- 专业: 植物生理与生化
3楼2010-01-16 12:39:08
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 1-16 12:58
雨后郁金香(金币+1,VIP+0): 1-16 13:46
1949stone(金币+2,VIP+0): 1-16 12:58
雨后郁金香(金币+1,VIP+0): 1-16 13:46
|
这里的原因我可以帮助分析一下，但愿对你有用 是这样的，如果你做一管PCR，那么所有的药品都是一样一样加的，而如果做8管，相信你是8管一起混合好，然后分装后单加模板的。那么这里就存在一个小问题，所有药剂混合分装和单独一个一个加，理论上是一样的，但是实际上有些溶液比较粘稠，当单加量特别小的时候，就被枪头上附着的量给人为扩大了，这里很明显，Taq酶正是这样的，单加量很小，枪头上粘很多，单放的时候你会多加很多 所以你应该知道改变什么条件也许会是PCR稳定了，但是我也只是分析，仅供参考 |
4楼2010-01-16 12:58:14
gn2003_0
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 742.1
- 散金: 10
- 帖子: 216
- 在线: 12.5小时
- 虫号: 796263
- 注册: 2009-06-17
- 性别: GG
- 专业: 细胞生物学
5楼2010-01-16 13:07:22
6楼2010-01-16 13:26:52
7楼2010-01-16 13:46:37
8楼2010-01-16 13:47:19
沙中清泉
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6527.7
- 散金: 24
- 帖子: 387
- 在线: 80.4小时
- 虫号: 610664
- 注册: 2008-09-23
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2010-01-16 14:43:37
雪山飞狐7233
铁杆木虫 (著名写手)
铁杆小虫
- MolEPI: 3
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 18825.6
- 散金: 209
- 红花: 44
- 帖子: 1530
- 在线: 199.1小时
- 虫号: 593313
- 注册: 2008-09-05
- 性别: GG
- 专业: 化学计量学与化学信息学
10楼2010-01-16 15:06:40