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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR不稳定。。。
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR不稳定。。。

RT，我现在需要从质粒上P一段序列，刚开始摸索条件都还好好的，后面想大量PCR进行回收，结果就出事了，结果却没有条带。。
摸索条件的时候只做了1管，做大量的时候做8管，每台PCR仪放4管，结果就是没有条带，郁闷。。。。
已经做了好几次都是这样了，甚至都重新设计了引物，做大量的时候，不管是每管分别加还是分装结果都是一样。。。我甚至都认好了PCR仪的孔。。。。
快被这个不稳定的PCR搞崩溃了。。。各位有遇到这种情况吗？你们都怎么解决的啊？希望大家都来说说，谢谢。。。
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1楼 2010-01-16 11:55:50
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小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)
我也遇到过，也想听听高人解答
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2楼2010-01-16 12:24:58
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wangwei2008

木虫 (职业作家)

小木虫之移花宫主
★
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-16 12:58
PCR不稳定那是很正常的。需要从各个方面考虑。
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3楼2010-01-16 12:39:08
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0): 1-16 12:58
雨后郁金香(金币+1,VIP+0): 1-16 13:46
这里的原因我可以帮助分析一下，但愿对你有用

是这样的，如果你做一管PCR，那么所有的药品都是一样一样加的，而如果做8管，相信你是8管一起混合好，然后分装后单加模板的。那么这里就存在一个小问题，所有药剂混合分装和单独一个一个加，理论上是一样的，但是实际上有些溶液比较粘稠，当单加量特别小的时候，就被枪头上附着的量给人为扩大了，这里很明显，Taq酶正是这样的，单加量很小，枪头上粘很多，单放的时候你会多加很多

所以你应该知道改变什么条件也许会是PCR稳定了，但是我也只是分析，仅供参考
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4楼2010-01-16 12:58:14
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gn2003_0

金虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 1-16 19:47
你摸索条件和后面大量回收用的是一样的试剂吗？使用各种试剂前一定要融好混匀的，你所说的不稳定是一点条带也没有了。确实很奇怪
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5楼2010-01-16 13:07:22
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陈思容

铜虫 (正式写手)
切胶回收试剂盒有问题吧
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6楼2010-01-16 13:26:52
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-1-16 12:58:
这里的原因我可以帮助分析一下，但愿对你有用

是这样的，如果你做一管PCR，那么所有的药品都是一样一样加的，而如果做8管，相信你是8管一起混合好，然后分装后单加模板的。那么这里就存在一个小问题，所有药剂 ...

可是我分开加也是这样的啊。。。唉。。都无语了
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7楼2010-01-16 13:46:37
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 陈思容 at 2010-1-16 13:26:
切胶回收试剂盒有问题吧

呵呵，还没有做到回收呢，是做很多管P的时候就没有条带了
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8楼2010-01-16 13:47:19
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沙中清泉

木虫 (正式写手)
★
雨后郁金香(金币+1,VIP+0): 1-16 20:09
那就换成一个一个加
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9楼2010-01-16 14:43:37
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
换一台仪器。我也遇到过这种情况。
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梦在路就在！
10楼2010-01-16 15:06:40
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