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[交流]
【求助/交流】有关补平酶切粘末端的问题 已有2人参与
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| 我的片段系双酶切切下，一端3'凹另一端5'凹，都需要补平后连入载体的sma1位点，是不是不能用pfu 补平阿？t4呢？请教方法，谢谢！ |
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liyouran85
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2楼2010-01-13 16:23:37
3楼2010-01-13 17:31:04
liyouran85(金币+1):谢谢参与
amisking(金币-1):不要纯表情发帖哦！ 2010-04-18 13:06
amisking(金币-1):不要纯表情发帖哦！ 2010-04-18 13:06
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4楼2010-01-13 23:46:12
louyiceng
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5楼2010-04-18 09:49:09
lixg
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liyouran85(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2): 2010-04-18 13:07
liyouran85(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2): 2010-04-18 13:07
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酶切产物用乙醇沉淀，最终用25的ddH2O溶解。 补平： 在1.5 ml Eppendorf 管中加入下列成分： 10反应缓冲液 2.5 l微升 0.1% BSA 2.5 微升 1.7 mM dNTP mix 2.5 微升 酶切产物 16 微升 70度C放置5分钟，移入37度C水浴中。 加入1.5 微升 T4 DNA聚合酶，轻轻混匀，37度C 反应5分钟，用震荡器剧烈震荡使酶失活，乙醇沉淀，最后溶解在20微升l的ddH2O中。然后进行连接反应。 |
6楼2010-04-18 12:00:49