应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR整个质粒
91/1返回列表
查看: 806  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR整个质粒

RT，我需要在一个质粒里面引入我要的酶切点，所以设计了引物把整个质粒PCR下来，请问有人做过这样的吗？谈下你的经验跟感想啊，大家互相交流交流啊。。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-01-09 09:16:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boouy

银虫 (正式写手)
用得着那么做吗？
赞一下 回复此楼
2楼2010-01-09 09:24:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨后郁金香

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by boouy at 2010-1-9 09:24:
用得着那么做吗？

恩，没有办法啊，要用这个质粒，但是质粒本身的酶切点我都不能用。。。。所以就这样做了......
赞一下 回复此楼
3楼2010-01-09 09:29:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0): 1-9 20:28
是不是需要先酶切成线性哦？猜想中~~~~
赞一下(11人) 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2010-01-09 10:15:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 1-9 14:07
酶切后连上含有你要的酶切位点的dsOligo不就行了？
赞一下(21人) 回复此楼
5楼2010-01-09 10:26:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianhang

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 1-9 14:07
对哦，同意楼上观点。你可以先把质粒提出来，用质粒现有的酶切开，再把你要用的酶切位点连接好或者pcr成一段小片段，然后再连接再这个质粒上就行了！
赞一下(21人) 回复此楼
6楼2010-01-09 14:01:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以自己插入需要的扩克隆位点的。整个质粒PCR扩增？很难不出错配的。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-01-09 17:19:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

plantst5928

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
当然可以，点突变的原理是类似的。你再用引物扩PCR之后需要把原来的模板降解一下，然后转化就可以了。我记得是用DMT酶消化的。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-01-09 20:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangp3102

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以
引物设计的时候加上没切位点，然后全长质粒扩增，扩增完后用T4多聚核苷酸激酶进行产物磷酸化，这样就可以用T4连接酶连接了，但是不能保证错配，因为P的片段太大，建议用高保真DNA聚合酶，如KOD-Plus酶
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-01-20 15:27:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雨后郁金香 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 求调剂，985材料与化工348分 +7 涵竹刘 2026-04-11 9/450 2026-04-11 23:13 by 溪涧流水
[考研] 277 数一104，学硕，求调剂 +21 瓶子PZ 2026-04-09 23/1150 2026-04-11 23:12 by labixiaoqiao
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 085410 273分调剂 +4 X1999 2026-04-09 4/200 2026-04-11 13:05 by pies112
[考研] 化工求调剂！ +35 RichLi_ 2026-04-06 35/1750 2026-04-11 11:02 by zhq0425
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 13/650 2026-04-11 10:04 by maddjdld
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 307求调剂 +8 tzq94092 2026-04-10 8/400 2026-04-10 17:33 by 286640313
[考研] 336材料与化工085600求调剂 +21 水星记infp 2026-04-05 24/1200 2026-04-10 15:28 by luoyongfeng
[考研] 277求调剂 +19 倪建设 2026-04-06 19/950 2026-04-10 09:24 by guosr9609
[考研] 085600材料与化工专硕329 求调剂 +24 额cc 2026-04-06 25/1250 2026-04-09 16:01 by wp06
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 化工学硕 285求调剂 +26 Wisjxn 2026-04-07 26/1300 2026-04-08 14:42 by screening
[考研] 计算机11408 287 求调剂 +3 LiLe5 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:15 by shanqishi
[考研] 材料调剂 +13 汉123456 2026-04-07 14/700 2026-04-07 22:53 by 来看流星雨10
[考研] 277求调剂 数一104分 +9 瓶子PZ 2026-04-05 14/700 2026-04-07 17:52 by 蓝云思雨
[考研] 316求调剂 +7 yyx想调剂 2026-04-05 7/350 2026-04-07 14:31 by shdgaomin
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭