| 查看: 284 | 回复: 2 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
scauchjy金虫 (著名写手)
|
[交流]
【求助/交流】Western结果老是有问题
|
||
|
就我的western blot问题再此各位战友请教。 我做的是香蕉果实一个转录因子的western，大小26 kDa左右，上样30 ug，我们做过考染，条带比较清晰，抗体是委托公司通过原核表达，蛋白纯化和兔血清纯化得来的，我们的转膜条件是100 毫安转5 h，封闭液是订购GenWay公司的。4度封闭过夜。 第一次做的一抗浓度1：2000（封闭液稀释），反应3 h，二抗（羊抗兔AP标记，promeag公司）使用浓度1：5000（采用TBST稀释），反应1 h。NBT和BCIP显色。得到的结果是杂带多，目的条带为图片箭头所示（见图1）。 第二次做的时候调整一抗浓度1：5000，反应3 h，二抗（羊抗兔AP标记，使用浓度1：5000，反应2 h，得到的结果是条带少，且目的条带很微弱。而其中一个大小在50 kDa左右的杂带非常明显（见图2）。 同时，我们还做了一个二抗为HRP标记的，一抗浓度1：5000，反应3 h，二抗（抗兔HRP标记，使用浓度1：5000，反应2 h，普利莱超敏发光液ECL显色，孵育3 min，压片1.5 min，奇怪的是，这次显示出来的一个很明显的杂带在15-10 kDa之间，而目的条带也不是非常明显（见图3）。 是不是我第二次做的一抗浓度过低？请各位战友帮忙分析下，多谢了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有100人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
scauchjy
金虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 30782.5
- 红花: 6
- 帖子: 2917
- 在线: 286.9小时
- 虫号: 812783
- 注册: 2009-07-21
- 专业: 果树学
2楼2010-01-07 16:00:35
scauchjy
金虫 (著名写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 30782.5
- 红花: 6
- 帖子: 2917
- 在线: 286.9小时
- 虫号: 812783
- 注册: 2009-07-21
- 专业: 果树学
3楼2010-01-07 16:04:06
