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yujiaping1

木虫 (著名写手)

MolEPI: 3
应助: 1 (幼儿园)
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在线: 66.6小时
虫号: 929883
注册: 2009-12-17
性别: MM
专业: 疫苗学

[交流] 【求助/交流】TA克隆求租

我做TA克隆，遇到以下问题，请高手指点：
1、蓝白筛选，全部是白斑（已经放在4度冰箱显色了），难道全部是重组子
2、有一个板一个菌都没有，都是一起的，为什么会一个菌都不长，浓度加大又涂了一次，还是一个都没长
3、PCR检测无论是菌落PCR还是放大后的菌液进行PCR都没有任何条带，就连载体片段都没有
4、invitrogen的盒子提供的GW1和GW2引物，没有提供退火温度，我使用了50、55、65，根据Primer5计算应该是65.8度

由于遇到以上问题，我对胶回收产物进行了检测，结果条带清晰可见，虽然并不是特别亮

不知道这种情况谁遇到过，如果质粒转化进感受态细胞的话，即使载体自连也会有质粒片段跑出来的，会不会是转化失败，这种情况会全部是白斑吗？但是考虑到转化是很简单的步骤，我怀疑不会失败，那PCR检测会不会有问题？

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