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yujiaping1木虫 (著名写手)
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【求助/交流】TA克隆求租
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我做TA克隆，遇到以下问题，请高手指点： 1、蓝白筛选，全部是白斑（已经放在4度冰箱显色了），难道全部是重组子 2、有一个板一个菌都没有，都是一起的，为什么会一个菌都不长，浓度加大又涂了一次，还是一个都没长 3、PCR检测无论是菌落PCR还是放大后的菌液进行PCR都没有任何条带，就连载体片段都没有 4、invitrogen的盒子提供的GW1和GW2引物，没有提供退火温度，我使用了50、55、65，根据Primer5计算应该是65.8度 由于遇到以上问题，我对胶回收产物进行了检测，结果条带清晰可见，虽然并不是特别亮 不知道这种情况谁遇到过，如果质粒转化进感受态细胞的话，即使载体自连也会有质粒片段跑出来的，会不会是转化失败，这种情况会全部是白斑吗？但是考虑到转化是很简单的步骤，我怀疑不会失败，那PCR检测会不会有问题？ |
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