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jackchen129至尊木虫 (职业作家)
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[交流]
【求助/交流】请教紫外法脱氧核糖核酸标准曲线的制作
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请教紫外法脱氧核糖核酸标准曲线的制作及样品中脱氧核糖核酸含量的测定详细步骤与方法。要用哪种标准品？是不是直接在260nm处测定吸光值就可以？ 谢谢！！！ [ Last edited by jackchen129 on 2009-12-27 at 15:37 ] |
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1、试剂 （1）TE缓冲液：10mol/L Tris-HCL(pH8)1mmol/L EDTA. （2）无菌蒸馏水 2、步骤： （1）首先用TE缓冲液或蒸馏水对待侧DNA样品进行1：20或更高倍数的稀释。 （2）用TE缓冲液或蒸馏水作为空白，在波长为260nm、280nm及230nm处调节紫外分光光度计读数为0. （3）加入DNA稀释液。鱼三处波长处读取，记录OD值。通过下列公式计算DNA的浓度或纯度：μg/μl a、[ssDNA]=33×(OD260-OD310)×稀释倍数 b、[dsDNA]=50×(OD260-OD310)×稀释倍数 c、[ssRNA]=40×(OD260-OD310)×稀释倍数 或DNA质量浓度μg/ml=A260×50×稀释倍数 |
2楼2009-12-27 16:15:14