24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1024  |  回复: 9
当前主题已经存档。

qing1985

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于DNA测序问题

有哪位大虾可以帮下忙,帮小弟解决些问题:
       我将样品用切胶的方法来纯化,用OMEGA的试剂盒来回收,但送去测序的时候老是出现信号衰减,请问是什么原因啊?

[ Last edited by amisking on 2009-12-26 at 13:00 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

09021122

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5,VIP+0): 12-26 13:01
一:纯化后有没有检测,看看条带的亮度如何.
二:DNA片段的长度是多少?如果很长的话,可能测不通。
三:测序引物是否有问题。
四:建议最好做克隆,因为可能后的测序效果很好,而且较准确。
雄关漫道真如铁,而今迈步从头越
2楼2009-12-26 12:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)


1949stone(金币+1,VIP+0): 12-26 19:20
PCR产物直接测序?
建议做TA克隆,鉴定后测序
3楼2009-12-26 13:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genomelin

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 12-26 19:21
qing1985(金币+5,VIP+0): 1-7 15:01
可能是你的模板前段有复杂的二级结构,送去测序的时候让公司多加点ET或者直接用BigDye做测序反应,也有可能是测序反应的时候引物量少了,反应后的小片段过多,也会有衰减的现象
4楼2009-12-26 13:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qing1985

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 09021122 at 2009-12-26 12:58:
一:纯化后有没有检测,看看条带的亮度如何.
二:DNA片段的长度是多少?如果很长的话,可能测不通。
三:测序引物是否有问题。
四:建议最好做克隆,因为可能后的测序效果很好,而且较准确。

纯化后检测都是可以达到10ng/ul的,片段大小是700bp左右,测序的时候到300多就开始衰减了,有可能是我的纯化过程中的东西残留影响测序吗?
5楼2009-12-26 19:19:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sj_wu

金虫 (正式写手)

建议最好做克隆,因为可能后的测序效果很好,而且较准确
6楼2009-12-26 19:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thinka

铜虫 (著名写手)

看楼上有很多人建议人家克隆测序,也不管人家实测来干什么的,如果是测SNP的话怎么能克隆测序呢。
楼主可以把你的测序结果发给我看一下么?测序我熟
7楼2009-12-26 23:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

thinka

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by qing1985 at 2009-12-26 19:19:


纯化后检测都是可以达到10ng/ul的,片段大小是700bp左右,测序的时候到300多就开始衰减了,有可能是我的纯化过程中的东西残留影响测序吗?

你的样品浓度偏低了
8楼2009-12-26 23:13:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genomelin

银虫 (小有名气)

样品浓度过低不会造成衰减信号的
9楼2009-12-31 11:10:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

adom2009

铁杆木虫 (正式写手)

可能是样品模板加过多,即模板浓度相对过高,导致小片段过多,形成提前衰落
10楼2010-01-02 12:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qing1985 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +24 hualkop 2026-04-12 26/1300 2026-04-18 23:33 by 路病情
[考研] 291求调剂 +10 关忆北. 2026-04-14 10/500 2026-04-18 23:32 by 路病情
[考研] 生物学调剂 +10 纸扇zhishan 2026-04-13 10/500 2026-04-18 21:19 by zqndavala
[考研] 320求调剂 +5 深郊akm 2026-04-17 5/250 2026-04-18 19:52 by 王珺璞
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[考研] 化工学硕294分,求导师收留 +33 yzyzx 2026-04-12 37/1850 2026-04-17 23:00 by wunaiy88
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[考研] 304求调剂 +7 castLight 2026-04-16 7/350 2026-04-17 20:05 by 关一盏灯cd
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-16 15:18 by jiahl2024
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
[考研] B区0809 ,数一英一,290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 调剂结束 +6 floriea 2026-04-12 8/400 2026-04-12 18:13 by zhouxiaoyu
信息提示
请填处理意见