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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因克隆
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xtaqo045

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】基因克隆

帮帮忙，请问高手们，
我做酶基因克隆，挑取阳性菌落做菌落PCR，得出的基因片段是我所要的目的基因的两倍（我要的目的基因900-1000kb，而菌落PCR出来的却是2000kb）；我又从阳性菌落中提取质粒，用质粒PCR出来的结果也是2000kb的基因片段，为什么会出现这样的结果？我该怎么办呢？请您们帮帮忙！谢谢！
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1楼 2009-12-24 12:59:47
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-24 22:30
你PCR验证时设计的引物位点在哪里？如果是在质粒上分别在前后加了序列的话也有可能的。还有就是你目的基因PCR的时候大小正确吗？
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6楼2009-12-24 21:38:57
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thinka

铜虫 (著名写手)
★ ★
xtaqo045(金币+2,VIP+0): 12-24 13:27
你先说说你用的什么载体?菌落用的什么引物?
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2楼2009-12-24 13:12:25
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xtaqo045

金虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1,VIP+0): 12-24 21:06
pUM-T载体，引物使自己设计的，引物一直都很好用
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3楼2009-12-24 13:26:58
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★
xtaqo045(金币+1,VIP+0): 12-24 20:18
估计不是目的片段。可以测序看看是什么
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
4楼2009-12-24 13:57:59
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