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xtaqo045

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】基因克隆

帮帮忙,请问高手们,
我做酶基因克隆,挑取阳性菌落做菌落PCR,得出的基因片段是我所要的目的基因的两倍(我要的目的基因900-1000kb,而菌落PCR出来的却是2000kb);我又从阳性菌落中提取质粒,用质粒PCR出来的结果也是2000kb的基因片段,为什么会出现这样的结果?我该怎么办呢?请您们帮帮忙!谢谢!
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thinka

铜虫 (著名写手)

★ ★
xtaqo045(金币+2,VIP+0): 12-24 13:27
你先说说你用的什么载体?菌落用的什么引物?
2楼2009-12-24 13:12:25
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xtaqo045

金虫 (小有名气)


1949stone(金币+1,VIP+0): 12-24 21:06
pUM-T载体,引物使自己设计的,引物一直都很好用
3楼2009-12-24 13:26:58
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


xtaqo045(金币+1,VIP+0): 12-24 20:18
估计不是目的片段。可以测序看看是什么
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
4楼2009-12-24 13:57:59
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thinka

铜虫 (著名写手)


xtaqo045(金币+1,VIP+0): 12-24 20:18
自连的时候带多大啊?加上你的片段有2000么?不要忘了自载体自己的一部分序列哦
5楼2009-12-24 19:56:29
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-24 22:30
你PCR验证时设计的引物位点在哪里?如果是在质粒上分别在前后加了序列的话也有可能的。还有就是你目的基因PCR的时候大小正确吗?
6楼2009-12-24 21:38:57
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super1998

金虫 (小有名气)


xtaqo045(金币+1,VIP+0): 12-29 10:41
先不要用通用引物扩。直接用目的基因两端引物扩一下,如果还是大很多,那肯定不是,
123
7楼2009-12-24 23:25:38
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wt414441794

铁虫 (正式写手)

xtaqo045(金币+5): 2010-03-09 10:44
好好学习
8楼2010-03-09 09:45:18
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