24小时热门版块排行榜    

查看: 957  |  回复: 7
当前主题已经存档。

bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

[交流] 请教:PCR引物设计几点问题

最近在学习PCR引物设计,向各位请教以下几点问题:
1、对于引入的酶切位点有什么要求吗?
2、对于已知序列的扩增,设计的引物是不是必须要位于目的基因的两侧?
感谢各位高手指点迷津,小女子不胜感激。
回复此楼
我们都是芸芸众生的小人物,相遇相知,都是幸福!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

竹子2225

银虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:06
你加入的酶切位点应该是你要连接的载体上有的,并且在你的目的基因中不包含的
2楼2009-12-05 17:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:07
第二个问题要看你扩增的目的了,若是扩全长的话,当然位于两端最好了,要是扩其中某部分,你得自己合计着了
3楼2009-12-05 17:06:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:07
补充一下楼上的两位,引入的酶切位点最好是年末端的限制性内切酶,且要加入保护碱基。
4楼2009-12-05 17:20:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianpingpe

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 12-5 18:32
bettyshan(金币+3,VIP+0): 12-6 23:08
引入的酶切位点要是你基因内部没有的,酶切位点肯定在你的基因的两端,这样你才能得到全长的完整的基因。如果你后面要酶切连接的话,可以直接加入保护碱基,可以进行pcr产物的直接酶切。保护碱基可以参考neb的说明书,那个上面有详细的说明,比较难酶切的位点添加的饱和碱基要多一些。酶切位点还要看你以后弄的载体,以后的载体有的,而且比较常见的,这样可以降低成本,常用酶便宜些。
5楼2009-12-05 18:06:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuezhen

银虫 (小有名气)

学习学习!
6楼2009-12-05 18:52:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)

位于目的基因两侧?
是一个上游引物,一个下游引物吧
若要全长,克隆出来测序后再用RACE
7楼2009-12-05 23:43:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-14 21:40
补充下,千万不要选择两个同尾酶,等构建好表达载体,发现连反,就只能泪奔了。
Thank-you,so-blue.
8楼2009-12-06 13:27:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bettyshan 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 86/4300 2026-08-18 00:18 by longsantaizi
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见