24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 831  |  回复: 7
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

[交流] 请教:PCR引物设计几点问题

最近在学习PCR引物设计,向各位请教以下几点问题:
1、对于引入的酶切位点有什么要求吗?
2、对于已知序列的扩增,设计的引物是不是必须要位于目的基因的两侧?
感谢各位高手指点迷津,小女子不胜感激。
回复此楼

» 猜你喜欢

我们都是芸芸众生的小人物,相遇相知,都是幸福!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianpingpe

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 12-5 18:32
bettyshan(金币+3,VIP+0): 12-6 23:08
引入的酶切位点要是你基因内部没有的,酶切位点肯定在你的基因的两端,这样你才能得到全长的完整的基因。如果你后面要酶切连接的话,可以直接加入保护碱基,可以进行pcr产物的直接酶切。保护碱基可以参考neb的说明书,那个上面有详细的说明,比较难酶切的位点添加的饱和碱基要多一些。酶切位点还要看你以后弄的载体,以后的载体有的,而且比较常见的,这样可以降低成本,常用酶便宜些。
5楼2009-12-05 18:06:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

竹子2225

银虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:06
你加入的酶切位点应该是你要连接的载体上有的,并且在你的目的基因中不包含的
2楼2009-12-05 17:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:07
第二个问题要看你扩增的目的了,若是扩全长的话,当然位于两端最好了,要是扩其中某部分,你得自己合计着了
3楼2009-12-05 17:06:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:07
补充一下楼上的两位,引入的酶切位点最好是年末端的限制性内切酶,且要加入保护碱基。
4楼2009-12-05 17:20:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 恳请有学校收留 +3 柯淮然 2026-04-12 3/150 2026-04-14 16:25 by 逆水乘风
[考研] 0854调剂 +11 长弓傲 2026-04-12 14/700 2026-04-14 16:07 by 逆水乘风
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+6 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 28/1400 2026-04-14 15:44 by zs92450
[考研] 药学求调剂 +6 RussHu 2026-04-12 7/350 2026-04-14 15:16 by sxdj2
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +6 zju2000 2026-04-14 17/850 2026-04-14 14:34 by jurkat.1640
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +18 振—TZ 2026-04-10 19/950 2026-04-14 10:34 by screening
[考研] 302求调剂 +10 易!? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 计算机类求调剂,22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 314求调剂 +18 xhhdjdjsjks 2026-04-09 19/950 2026-04-10 18:53 by HPUCZ
[考研] 一志愿矿大,材料工程专硕314分,0856可调都可以 +15 无懈可击的巨人 2026-04-09 15/750 2026-04-10 18:10 by hmn_wj
[考研] 0703化学求调剂 +21 不知名的小卅 2026-04-08 21/1050 2026-04-09 18:55 by l_paradox
[考研] 一志愿中科院105500专业总分315求调剂 +6 lallalh 2026-04-09 7/350 2026-04-09 17:51 by lallalh
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 296求调剂 +3 汪!?! 2026-04-08 3/150 2026-04-08 22:00 by zhouyuwinner
[考研] 生物学学硕,初试351分,求调剂 +4 …~、王…~ 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:49 by limeifeng
信息提示
请填处理意见