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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

[交流] 请教:PCR引物设计几点问题

最近在学习PCR引物设计,向各位请教以下几点问题:
1、对于引入的酶切位点有什么要求吗?
2、对于已知序列的扩增,设计的引物是不是必须要位于目的基因的两侧?
感谢各位高手指点迷津,小女子不胜感激。
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我们都是芸芸众生的小人物,相遇相知,都是幸福!
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shuiyue2728

新虫 (正式写手)

位于目的基因两侧?
是一个上游引物,一个下游引物吧
若要全长,克隆出来测序后再用RACE
7楼2009-12-05 23:43:48
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竹子2225

银虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:06
你加入的酶切位点应该是你要连接的载体上有的,并且在你的目的基因中不包含的
2楼2009-12-05 17:02:41
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695

木虫 (职业作家)

★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:07
第二个问题要看你扩增的目的了,若是扩全长的话,当然位于两端最好了,要是扩其中某部分,你得自己合计着了
3楼2009-12-05 17:06:21
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changes

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:07
补充一下楼上的两位,引入的酶切位点最好是年末端的限制性内切酶,且要加入保护碱基。
4楼2009-12-05 17:20:24
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