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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教：PCR引物设计几点问题
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bettyshan

木虫 (正式写手)

梦幻biobrick

[交流] 请教：PCR引物设计几点问题

最近在学习PCR引物设计，向各位请教以下几点问题：
1、对于引入的酶切位点有什么要求吗？
2、对于已知序列的扩增，设计的引物是不是必须要位于目的基因的两侧？
感谢各位高手指点迷津，小女子不胜感激。
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我们都是芸芸众生的小人物，相遇相知，都是幸福！
1楼 2009-12-05 16:04:36
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shuiyue2728

新虫 (正式写手)
位于目的基因两侧？
是一个上游引物，一个下游引物吧
若要全长，克隆出来测序后再用RACE
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7楼2009-12-05 23:43:48
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竹子2225

银虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:06
你加入的酶切位点应该是你要连接的载体上有的，并且在你的目的基因中不包含的
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2楼2009-12-05 17:02:41
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695

木虫 (职业作家)
★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:07
第二个问题要看你扩增的目的了，若是扩全长的话，当然位于两端最好了，要是扩其中某部分，你得自己合计着了
赞一下(22人) 回复此楼
3楼2009-12-05 17:06:21
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changes

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 12-5 17:37
bettyshan(金币+1,VIP+0): 12-6 23:07
补充一下楼上的两位，引入的酶切位点最好是年末端的限制性内切酶，且要加入保护碱基。
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4楼2009-12-05 17:20:24
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