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【奖励】本帖被评价3次，作者三磷酸腺苷增加金币 2.3 个

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

[资源] 关于实验，关于细节

在小木虫混了很久，也re过不少帖子，自己也算摸过不少类型的实验
刚刚看到一个谈细节的帖子，让我感觉有些经验上的东西需要跟大家交流

怎么样做出一个漂亮的数据，这是大家所关心的
总体来说，可以分为以下几个方面来考虑
1、良好的实验设计，包括专业上的以及统计学上的，涉及对照、因素等多个方面
我想这个很好理解，不多说什么了。

2、巧手，善于观察的眼睛，以及善于应变的脑子
稳定而高超实验技术，自然对漂亮的数据有贡献。比如制备上流式的样品，就是要充分吹成单细胞，成团没法测，吹破了峰图很恶心。尤其是用流式做损伤检测的，如Annexin V/PI双染凋亡的，在消化细胞的时候如果没处理好吹过头了，那么到时候就会有很多诡异的dot。细节很重要，尤其要从耗材、仪器、试剂以及实验手法方面入手去考虑。比如做QPCR，不用进口耗材，那么SD就会超大。如果不混好一个stock mix再分装，那么也会造成SD很大。
善于观察，这点很重要，有时候一些现象就是明摆在那里，如果不懂得分辨，那么就错失良机，或者得出错误的结论。我想做病理的估计会很有体会。有时候就是差那么一点点。骨架变化、坏死、凋亡之类的，光镜相差下面是可以看出个一二的。（虽然不能下结论，但可以给你心里有底）
应变，我觉得就是衡量一个人做实验是否聪明的一个指标。实验过程或者结果并非都一定是符合预期的，同时具体实验的方法，也未必是死按protocol的。比如我现在配DMEM，都不测pH值了，肉眼观察酚红指示剂的变化就好了。同时，过了滤膜会升高0.1~0.2个pH，放久了更加容易变碱，因此每次我都会调“酸”一些。又比如，涉及需不需要定容，或者需不需要无菌操作之类种种问题，我想，明白了实验原理就知道自己应该怎么选择。我很难理解为何有些人配PBS、LB培养基都要定容，难道量筒会差很远？这个差异对后续有很大的影响？也不明白为何测MTT或者抽个核酸都要全程无菌。到底是什么在影响实验结果的因素，其实要从原理上去考虑，而不是其他无谓的治标不治本的措施。

3、聪明地对待实验结果
分两个方面说吧，激进的人，可能双染上流式有变化，就说细胞凋亡了，悲观或者说不善于看待问题的，会觉得怎么对比起来没有任何变化。
对于许多生物学现象的描述，很难说有一些什么唯一的金标准，只有少数情况下例外。而曾经被奉为金标准的，用现在的眼光来看，是否还是什么金标准呢？（曾经GFAP是作为胶质瘤分级的金标准，可是仅有GFAP就能说明恶性程度吗？我想做肿瘤的都应该很清楚。）更何况，是根本还谈不上金标准的指标。综合考虑，是推断的基本前提。另外还得补一句，有统计学意义，并不一定有生物学意义，尽管P小于一千万分之一也好，总之没有专业眼光，单纯统计学，只是在骗人而已，是在玩数字游戏。
而对于后者我就不多说什么了，抽身出来思考生命现象本身，比去思考一条单一的通路、单一的蛋白水平变化，是更加有意义的。做RT发现转录量增加，与预期相悖，但决定性的还是表达量，以及活性调节和降解的平衡。做出来没变或者相悖，不要灰心，从另外个角度去考察，会发现更多有趣的东西。

本帖关键词：巧手统计学试剂 dot mix

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