应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR引物设计求助（有图）
汕头大学海洋科学接受调剂
211/3返回列表123下一页
查看: 893  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] PCR引物设计求助（有图）

1 载体PET32a 上基因片段
2 PET32 图谱
3 PQE30 图谱
目前情况是从师兄那要到了 带有片段1的PET32a载体，现在需要倒换载体，将其导入PQE30中，PQE30中有一个酶切位点SAL I  另一个酶切位点ECOR I 在PQE30上没有位于多克隆位点，现在需要通过PCR设计引物，希望大家能给我详细的方法，谢谢！

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2009-11-26 at 10:33 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-11-26 10:15:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

PET32a

PET32a图谱
赞一下 回复此楼
2楼2009-11-26 10:18:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

PQE30图谱

PQE30图谱

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2009-11-26 at 15:44 ]
赞一下 回复此楼
3楼2009-11-26 10:18:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
您想问什么呢？
回复此楼
4楼2009-11-26 10:23:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
有人帮忙吗？  这个引物该怎么设计啊？
赞一下 回复此楼
5楼2009-11-26 11:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水过无恒

铜虫 (正式写手)
★
jiangkuo0520(金币+1,VIP+0):我确实没做过，现在一头雾水 11-26 15:32
估计你是没做过分子克隆，先把片段1的PET32a载体上的做PCR扩增出来，当然设计引物时两端要引入酶切位点，置于用什么酶，就要看PQE30多克隆位点处的，你的图我的看不见，如果PQE30和PQE30a一样的话，应该有NOT I,BGL II，就用这两个酶吧，很好切。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2009-11-26 12:28:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
jiangkuo0520(金币+1,VIP+0):怎么找同尾酶呢？谢谢 11-26 15:32
看能找到同尾酶不，如果有合适的同尾酶酶切位点，可以省掉PCR过程了。
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
7楼2009-11-26 12:51:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)
★
jiangkuo0520(金币+1,VIP+0):我师兄的片段2段是2个酶，我单酶切怎么能切下来啊？ 11-26 15:33
上下游的引物使用你师兄以前扩此片段的引物，只是把EcoRI的切点换成SalI切点，到时单酶切插入即可，通过PCR或者酶切验证插入方向
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2009-11-26 13:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
还是不大明白啊
回复此楼
9楼2009-11-26 15:34:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
楼主，你发的PQE30的图谱有问题或者没有标记清楚吧！你的多克隆位点前面没有启动子，而启动子在最后，并且是反向的。 你的PQE30中有个Ecor1的酶切位点，但是只要它在promoter下游即使不在多克隆位点也可以用。但是你的多克隆位点前面根本没标启动子！
赞一下 回复此楼
10楼2009-11-26 15:38:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiangkuo0520 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085500求调剂材料 +11 易11122 2026-04-09 11/550 2026-04-14 17:59 by lhj2009
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 296求调剂 +8 汪！？！ 2026-04-09 9/450 2026-04-14 15:15 by 逆水乘风
[考研] 生物学调剂，一志愿西南大学348，Top期刊一区二作、二区三作，三等奖学金三次 +5 candyyyi 2026-04-09 5/250 2026-04-13 09:02 by 可淡不可忘
[考研] 314求调剂 +24 wakeluofu 2026-04-09 25/1250 2026-04-13 08:58 by lhj2009
[考研] 求调剂288 +7 ioodiiij 2026-04-10 9/450 2026-04-13 08:33 by Hayaay
[考研] 322求调剂 +6 123安康 2026-04-12 13/650 2026-04-12 15:51 by 123安康
[考研] 电气工程专硕320求调剂 +5 小麻子111 2026-04-10 5/250 2026-04-12 10:47 by zhouyuwinner
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-09 12/600 2026-04-12 10:32 by 逆水乘风
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 085400 328分 求调剂 +10 喂你一个大橙子 2026-04-09 14/700 2026-04-11 19:53 by lqspecial
[考研] 085501机械专硕 302分 不挑专业求调剂 +7 汪某. 2026-04-09 7/350 2026-04-11 14:37 by luhong1990
[考研] 293求调剂 +6 勇远库爱314 2026-04-08 6/300 2026-04-11 10:08 by zhq0425
[考研] 346，工科求调剂 +3 moser233 2026-04-09 3/150 2026-04-11 10:04 by zhq0425
[考研] 22408 352分求调剂0854类 +4 努力的夏末 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:57 by zhq0425
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 348求调剂 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 17:20 by 段伟艳
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭