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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR引物设计求助（有图）
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] PCR引物设计求助（有图）

1 载体PET32a 上基因片段
2 PET32 图谱
3 PQE30 图谱
目前情况是从师兄那要到了 带有片段1的PET32a载体，现在需要倒换载体，将其导入PQE30中，PQE30中有一个酶切位点SAL I  另一个酶切位点ECOR I 在PQE30上没有位于多克隆位点，现在需要通过PCR设计引物，希望大家能给我详细的方法，谢谢！

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2009-11-26 at 10:33 ]
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1楼 2009-11-26 10:15:08
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

PET32a

PET32a图谱
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2楼2009-11-26 10:18:03
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

PQE30图谱

PQE30图谱

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2009-11-26 at 15:44 ]
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3楼2009-11-26 10:18:54
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liyong1981

金虫 (正式写手)
您想问什么呢？
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4楼2009-11-26 10:23:12
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
有人帮忙吗？  这个引物该怎么设计啊？
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5楼2009-11-26 11:59:44
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水过无恒

铜虫 (正式写手)
★
jiangkuo0520(金币+1,VIP+0):我确实没做过，现在一头雾水 11-26 15:32
估计你是没做过分子克隆，先把片段1的PET32a载体上的做PCR扩增出来，当然设计引物时两端要引入酶切位点，置于用什么酶，就要看PQE30多克隆位点处的，你的图我的看不见，如果PQE30和PQE30a一样的话，应该有NOT I,BGL II，就用这两个酶吧，很好切。
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6楼2009-11-26 12:28:02
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
jiangkuo0520(金币+1,VIP+0):怎么找同尾酶呢？谢谢 11-26 15:32
看能找到同尾酶不，如果有合适的同尾酶酶切位点，可以省掉PCR过程了。
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Thank-you，so-blue.
7楼2009-11-26 12:51:47
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
jiangkuo0520(金币+1,VIP+0):我师兄的片段2段是2个酶，我单酶切怎么能切下来啊？ 11-26 15:33
上下游的引物使用你师兄以前扩此片段的引物，只是把EcoRI的切点换成SalI切点，到时单酶切插入即可，通过PCR或者酶切验证插入方向
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8楼2009-11-26 13:09:41
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jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
还是不大明白啊
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9楼2009-11-26 15:34:30
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
楼主，你发的PQE30的图谱有问题或者没有标记清楚吧！你的多克隆位点前面没有启动子，而启动子在最后，并且是反向的。 你的PQE30中有个Ecor1的酶切位点，但是只要它在promoter下游即使不在多克隆位点也可以用。但是你的多克隆位点前面根本没标启动子！
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10楼2009-11-26 15:38:57
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