应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR引物设计求助（有图）
211/3返回列表123下一页
查看: 864  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

[交流] PCR引物设计求助（有图）

1 载体PET32a 上基因片段
2 PET32 图谱
3 PQE30 图谱
目前情况是从师兄那要到了 带有片段1的PET32a载体，现在需要倒换载体，将其导入PQE30中，PQE30中有一个酶切位点SAL I  另一个酶切位点ECOR I 在PQE30上没有位于多克隆位点，现在需要通过PCR设计引物，希望大家能给我详细的方法，谢谢！

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2009-11-26 at 10:33 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-11-26 10:15:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

PET32a

PET32a图谱
赞一下 回复此楼
2楼2009-11-26 10:18:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)

PQE30图谱

PQE30图谱

[ Last edited by jiangkuo0520 on 2009-11-26 at 15:44 ]
赞一下 回复此楼
3楼2009-11-26 10:18:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
您想问什么呢？
回复此楼
4楼2009-11-26 10:23:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
有人帮忙吗？  这个引物该怎么设计啊？
赞一下 回复此楼
5楼2009-11-26 11:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水过无恒

铜虫 (正式写手)
★
jiangkuo0520(金币+1,VIP+0):我确实没做过，现在一头雾水 11-26 15:32
估计你是没做过分子克隆，先把片段1的PET32a载体上的做PCR扩增出来，当然设计引物时两端要引入酶切位点，置于用什么酶，就要看PQE30多克隆位点处的，你的图我的看不见，如果PQE30和PQE30a一样的话，应该有NOT I,BGL II，就用这两个酶吧，很好切。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2009-11-26 12:28:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
jiangkuo0520(金币+1,VIP+0):怎么找同尾酶呢？谢谢 11-26 15:32
看能找到同尾酶不，如果有合适的同尾酶酶切位点，可以省掉PCR过程了。
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
7楼2009-11-26 12:51:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)
★
jiangkuo0520(金币+1,VIP+0):我师兄的片段2段是2个酶，我单酶切怎么能切下来啊？ 11-26 15:33
上下游的引物使用你师兄以前扩此片段的引物，只是把EcoRI的切点换成SalI切点，到时单酶切插入即可，通过PCR或者酶切验证插入方向
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2009-11-26 13:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangkuo0520

金虫 (正式写手)
还是不大明白啊
回复此楼
9楼2009-11-26 15:34:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
楼主，你发的PQE30的图谱有问题或者没有标记清楚吧！你的多克隆位点前面没有启动子，而启动子在最后，并且是反向的。 你的PQE30中有个Ecor1的酶切位点，但是只要它在promoter下游即使不在多克隆位点也可以用。但是你的多克隆位点前面根本没标启动子！
赞一下 回复此楼
10楼2009-11-26 15:38:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiangkuo0520 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +7 自由煎饼果子 2026-03-16 7/350 2026-03-22 22:40 by ACS Nano——
[考研] 招08考数学 +4 laoshidan 2026-03-20 8/400 2026-03-22 19:56 by 小皮蛋酱
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 293求调剂 +12 zjl的号 2026-03-16 17/850 2026-03-22 16:51 by i_cooler
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭