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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 凯氏定氮测定标准蛋白称样量多少？
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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)

[交流] 凯氏定氮测定标准蛋白称样量多少？

大家用凯氏定氮的方法测定标准蛋白的浓度，需要多大的称样量啊！往高手回复，非常感谢！
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1楼 2009-11-20 15:07:58
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chenyyy

无虫 (正式写手)
★
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):谢谢参与，但是我们蛋白浓度太低了，并且样品是含氮的，所以想把蛋白沉淀分离出了，后溶解测定 11-23 11:26
纯度80%以上的样品,0.1克就可以了
我们公司品控天天在做
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10楼2009-11-23 11:20:55
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普通回帖

woxinfeiyang

木虫 (正式写手)
我实验室有一个凯氏定氮仪，想测一下样品中蛋白的浓度，用标准蛋白来验证，大家有做凯氏定氮确定标准蛋白的浓度的吗？往高手指点！
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2楼2009-11-20 15:12:00
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hbwang6391

木虫 (著名写手)

忽忽家族觉糖主
★ ★
1949stone(金币+1,VIP+0):同意 11-21 15:07
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):谢谢，可我的样品含氮并且含蛋白浓度太低（约0.1%），我想将蛋白沉淀出来再用凯氏定氮进行测定，从而算出浓度，后再验证用其他方法测定的准确性。 11-22 00:24
没有测定过标准蛋白的，但根据经验，我感觉你应该要把样品稀释到一定程度，要不然的话，蛋白含量太高你滴定的时候会非常麻烦，具体稀释到多少要看你是微量测定还是常量测定了
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笑笑别人，让别人笑笑，笑笑自己
3楼2009-11-20 20:10:11
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helingling

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):同意 11-21 15:06
woxinfeiyang(金币+2,VIP+0):谢谢，我的浓度可能太低了，我的大概是微克级别的。 11-22 00:25
采用常量法操作，取样量为相当于含氮量25-30mg，含氮量*6.25=蛋白质含量
采用半微量法，取样量为相当于含氮量1.0-2.0mg
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4楼2009-11-20 22:59:20
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358219418

金虫 (正式写手)
★
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):谢谢，凯氏定氮也要做标准曲线啊？ 11-22 00:26
这个需要限制吗？记得只要在标准曲线范围内就可以的吧
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木虫，快乐并坚强着
5楼2009-11-21 14:58:14
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qingfengwu

金虫 (小有名气)
★
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):谢谢参与，请问标准你这个标曲的浓度下的蛋白能用凯氏定氮测定吗？我的蛋白浓度大概也就是几ug/ml 11-22 00:28
先做一条标准曲线，0, 1, 2, 4, 7, 10, 15, 20 ug/ml这些点使用标准蛋白制定标准曲线。

然后用你的蛋白一般稀释500倍左右，如果太浓了，需要继续稀释，反正要在标准曲线范围内才能测得准。

测出来的蛋白浓度调到1mg/ml比较适宜。
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6楼2009-11-21 18:30:06
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cato8163

银虫 (正式写手)
★
woxinfeiyang(金币+1,VIP+0):谢谢参与，我的用硼酸吸收后根本就不变色，是不是蛋白浓度太低的原因 11-22 00:30
小可，以前做过一段时间饲料化验。
关于标准蛋白测定，没涉及到。
但你可以这样算一下，半微量滴定管是5mL，在滴定时最好是在刻度的三分之一到三分之二间。根据纯度可以折算的。
小可做饲料化验，鱼粉称量0.50-0.55克，饼粕类在0.60克左右。不过，你可根据实际情况来定。还有别的，就直接联系我吧。
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7楼2009-11-21 19:57:04
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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)
谢谢各位的回复，我主要是想用凯氏定氮的方法验证我做的其他方法的正确型！我的样品中含蛋白量很小，大约有0.1%左右，但样品含氮；我用约同样浓度的标准蛋白直接用凯氏定氮仪测定，但测定不到蛋白，是不是浓度太低含量太少了？很多标定标准蛋白不是用凯氏定氮的方法进行标定吗？所以，我想知道，大约需要多大的浓度才可以！谢谢各位了！
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8楼2009-11-22 00:21:07
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cato8163

银虫 (正式写手)
★ ★
woxinfeiyang(金币+2,VIP+0):谢谢，我的样品蛋白浓度不但小，我把蛋白沉淀出来加水溶解测定，我怕由于加水了硫酸浓度不够，所以就多加了两倍的硫酸，是不是硫酸浓度加的太多了 11-23 11:20
引用回帖:
Originally posted by woxinfeiyang at 2009-11-22 00:21:
谢谢各位的回复，我主要是想用凯氏定氮的方法验证我做的其他方法的正确型！我的样品中含蛋白量很小，大约有0.1%左右，但样品含氮；我用约同样浓度的标准蛋白直接用凯氏定氮仪测定，但测定不到蛋白，是不是浓度太低 ...

关于硼酸不变色，小可做实验用空白，也是变色的，只是颜色变的时间慢。
看到你的蛋白含量非常少，你看一下凯氏定氮法的说明吧，我个人认为这样低的含量，是不可以测的。空白的滴定也要0.1mL左右。按照推算，如果滴定时，结果是2mL，那你的称量质量是：17000g左右，你觉得可能吗？
小可，只是建议。
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9楼2009-11-23 10:42:39
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