24小时热门版块排行榜    

查看: 979  |  回复: 12
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小白3521

金虫 (小有名气)

[交流] 双酶切啊,越切越没有

郁闷死了,这段时间做双酶切,最开始用的是takara的酶切的,我嫌切的久而且不亮,听说用fermentas的酶好,就换这个牌子的酶,结果这个酶反而切不下来,而且我现在用takara酶切,按照以前能够切出来的体系也切不出来了,很奇怪。会不会有种可能,是片段从质粒里丢失了?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漫迹

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做酶切就相当于质粒被稀释了,不亮也正常吧,我也准备做这个,一同学习
9楼2009-11-19 21:11:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

heismeng

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-19 17:26
多做些量吧 25做不出来的时候我都做100的体系
然后BSA加上 两个酶的比例再调一下
片段一般不会从质粒中丢失的 我好几个月的都继续切也没问题
2楼2009-11-19 10:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grief

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-19 17:26
你切下来的片段是多少个碱基?碱基的数目和其亮度是成正比的。如果碱基少,酶切量又少,不亮是很正常的。
一般我们双酶切用的都是fermentas的酶,质粒大约1ug就可以了!
菌种最好保持其抗性压力,如果你不确定基因片段是否还在载体中,最好做个PCR鉴定下。
等待秋天
3楼2009-11-19 10:52:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by grief at 2009-11-19 10:52:
你切下来的片段是多少个碱基?碱基的数目和其亮度是成正比的。如果碱基少,酶切量又少,不亮是很正常的。
一般我们双酶切用的都是fermentas的酶,质粒大约1ug就可以了!
菌种最好保持其抗性压力,如果你不确定基 ...

我的片段是400多的,我觉得我提的质粒就不是很亮,也不知道什么原因,用的试剂盒提的
4楼2009-11-19 11:07:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +10 医学老男孩 2026-08-13 28/1400 2026-08-13 22:44 by 医学老男孩
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见