24小时热门版块排行榜    

查看: 528  |  回复: 5
当前主题已经存档。

hyw0794

木虫 (正式写手)

[交流] PCR扩增

请各位帮忙分析一下,采用哪种PCR进行扩增霉菌的DNA,如果用你的方法,我PCR出正确条带,再送20个金币。谢谢!
我用18SPCR做,没有条带。反应体系是18SPCR反应体系            
ddH2O          18.8 ul ,10×load buffer   2.5 ul,
    dNTP              2 ul,18SPF1          0.25 ul,18SPR          0.25 ul,
     LATaq酶         0.2 ul , 模版            1 ul , 总体积              25ul。
程序 95℃    8min;94℃    30sec,55℃     30sec,72℃     4min  30个循环;72℃     8min。
引物18SPF1:AGTAGTCATATGCTTGTCTC
18SPF2:TCTCAAAGATTAAGCCATGC
18SPR: TAATGATCCTTCCGCAGGTT
菌落图片传不上来。如果要看图片的话,我的qq是752409857,请与我联系。我把图片传给您。如果可行的话,另外再送10个金币。

[ Last edited by amisking on 2009-11-14 at 13:27 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没错过霉菌的,不过pcr体系受镁离子量影响
修炼ing,当虫仙……
2楼2009-11-14 12:39:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyw0794

木虫 (正式写手)

补充说明,我用的是公司加好镁离子的10×load buffer,谢谢各位积极回帖,有奖哦。
3楼2009-11-14 12:47:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

六妖妖

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个跟反应体系不是很大关系吧。你的模板有没有降解啊
4楼2009-11-14 22:43:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用这个程序跑跑看,模板做几个梯度,不稀释做个,稀释十倍做个,20倍做个。
95℃    5 min;

94℃    30 sec,
65℃     30 sec,
72℃     2 min  
15个循环;(每循环一次,退火温度降低1 ℃,直到退火温度降到50 ℃)

94℃    30 sec,
50℃     30 sec,
72℃     2 min  
15-20个循环;

72℃     10 min
4℃ forever
Thank-you,so-blue.
5楼2009-11-15 11:09:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyw0794

木虫 (正式写手)

模板没有降解,因为我跑完电泳后稀释做的,我以稀释100倍1000倍10000倍做的。引物有问题吗?你们帮忙分析一下,谢谢!
6楼2009-11-15 13:05:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hyw0794 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[文学芳草园] 阿姨 +3 汪汪锅 2026-08-09 3/150 2026-08-13 16:56 by 410610288
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 6/300 2026-08-13 15:34 by 高飞的梦想
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见