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hyw0794

木虫 (正式写手)

[交流] PCR扩增

请各位帮忙分析一下,采用哪种PCR进行扩增霉菌的DNA,如果用你的方法,我PCR出正确条带,再送20个金币。谢谢!
我用18SPCR做,没有条带。反应体系是18SPCR反应体系            
ddH2O          18.8 ul ,10×load buffer   2.5 ul,
    dNTP              2 ul,18SPF1          0.25 ul,18SPR          0.25 ul,
     LATaq酶         0.2 ul , 模版            1 ul , 总体积              25ul。
程序 95℃    8min;94℃    30sec,55℃     30sec,72℃     4min  30个循环;72℃     8min。
引物18SPF1:AGTAGTCATATGCTTGTCTC
18SPF2:TCTCAAAGATTAAGCCATGC
18SPR: TAATGATCCTTCCGCAGGTT
菌落图片传不上来。如果要看图片的话,我的qq是752409857,请与我联系。我把图片传给您。如果可行的话,另外再送10个金币。

[ Last edited by amisking on 2009-11-14 at 13:27 ]
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j2

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没错过霉菌的,不过pcr体系受镁离子量影响
修炼ing,当虫仙……
2楼2009-11-14 12:39:07
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hyw0794

木虫 (正式写手)

补充说明,我用的是公司加好镁离子的10×load buffer,谢谢各位积极回帖,有奖哦。
3楼2009-11-14 12:47:56
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六妖妖

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个跟反应体系不是很大关系吧。你的模板有没有降解啊
4楼2009-11-14 22:43:50
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用这个程序跑跑看,模板做几个梯度,不稀释做个,稀释十倍做个,20倍做个。
95℃    5 min;

94℃    30 sec,
65℃     30 sec,
72℃     2 min  
15个循环;(每循环一次,退火温度降低1 ℃,直到退火温度降到50 ℃)

94℃    30 sec,
50℃     30 sec,
72℃     2 min  
15-20个循环;

72℃     10 min
4℃ forever
Thank-you,so-blue.
5楼2009-11-15 11:09:55
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hyw0794

木虫 (正式写手)

模板没有降解,因为我跑完电泳后稀释做的,我以稀释100倍1000倍10000倍做的。引物有问题吗?你们帮忙分析一下,谢谢!
6楼2009-11-15 13:05:38
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