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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR扩增
汕头大学海洋科学接受调剂
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hyw0794

木虫 (正式写手)

[交流] PCR扩增

请各位帮忙分析一下，采用哪种PCR进行扩增霉菌的DNA，如果用你的方法，我PCR出正确条带，再送20个金币。谢谢！
我用18SPCR做，没有条带。反应体系是18SPCR反应体系            
ddH2O          18.8 ul　，10×load buffer   2.5 ul，
    dNTP              ２ ul，18SPF1          0.25 ul，18SPR          0.25 ul，
     LATaq酶         0.2 ul ， 模版            1 ul ，　总体积              25ul。
程序 95℃    8min；94℃    30sec，55℃     30sec，72℃     4min  30个循环；72℃     8min。
引物18SPF1：AGTAGTCATATGCTTGTCTC
18SPF2：TCTCAAAGATTAAGCCATGC
18SPR： TAATGATCCTTCCGCAGGTT
菌落图片传不上来。如果要看图片的话，我的ｑｑ是752409857，请与我联系。我把图片传给您。如果可行的话，另外再送10个金币。

[ Last edited by amisking on 2009-11-14 at 13:27 ]
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1楼 2009-11-14 12:13:20
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j2

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没错过霉菌的，不过pcr体系受镁离子量影响
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2009-11-14 12:39:07
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hyw0794

木虫 (正式写手)
补充说明，我用的是公司加好镁离子的10×load buffer，谢谢各位积极回帖，有奖哦。
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3楼2009-11-14 12:47:56
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六妖妖

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个跟反应体系不是很大关系吧。你的模板有没有降解啊
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-11-14 22:43:50
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用这个程序跑跑看，模板做几个梯度，不稀释做个，稀释十倍做个，20倍做个。
95℃    5 min；

94℃    30 sec，
65℃     30 sec，
72℃     2 min  
15个循环；（每循环一次，退火温度降低1 ℃，直到退火温度降到50 ℃）

94℃    30 sec，
50℃     30 sec，
72℃     2 min  
15-20个循环；

72℃     10 min
4℃ forever
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
5楼2009-11-15 11:09:55
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hyw0794

木虫 (正式写手)
模板没有降解,因为我跑完电泳后稀释做的，我以稀释１００倍１０００倍１００００倍做的。引物有问题吗？你们帮忙分析一下，谢谢！
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6楼2009-11-15 13:05:38
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