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[交流]
关于做DGGE遇到的问题，费解！！！已有1人参与
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最近一直在做DGGE的实验，从前期的提DNA开始，一直在摸索中前进，但是这一个月来，我的实验到了一个瓶颈期，一直找不到原因，在这里跟大家交流一下，看能不能找到时什么原因 1.PCR的结果经过琼脂糖电泳检验，有条带，经优化后条带比较单一； 2.去跑聚丙烯酰胺电泳的时候，出来的一直是这样的胶：只有胶孔处有条亮带，底下的胶是一整片的，什么条带都没有，甚至没有泳道； 3.我拿师兄已经跑过DGGE的pcr结果去跑，还是一样的结果，开始怀疑是药品的问题 4.让四楼师姐做DGGE的时候给带个样，我的pcr结果可以出来条带，还不错； 4用四楼师姐的全套药品，包括她已经配好的胶，刚用过一次（可以做出来）来做DGGE，加了我的pcr结果和师姐已经跑过DGGE剩下的PCR样品一起来做，出来的结果仍然是胶孔处有一亮带，底下的连泳道都没有，跟别说条带了，在这次实验的过程中，师姐一直在旁边指导我的操作，而且仪器师姐两天天刚用过，没问题。 做DGGE差不错一个多月了，前期以为是自己的操作，或者说是条件没有优化好，但做到后来发现不管我怎么优化实验条件，都是一样的结果（只有胶孔有亮带，底下连泳道都没有），但做完第四步骤后确实很受打击，突然发现失去了前进的方向，面对这样的结果不知道从何入手。 本来想放个图片上来的，但好像不太会，就不放上来了。 有做个DGGE的师兄师姐们，能给提点意见，说说自己的想法就最好了，先谢谢大家了。 这两天一直在思考是哪儿出问题了，现在能想到的是电泳是不是根本没跑起来，不然怎么会不往下跑呢，但是pump开了，电压从70V到120V都试过，应该是没有问题的，真的不知道是哪儿出问题了。 [ Last edited by amisking on 2010-4-18 at 21:50 ] |
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3楼2009-11-13 14:17:36
shirongjiu
金虫 (正式写手)
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good luck
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ziyinger(金币+1,VIP+0): 11-13 16:43
ziyinger(金币+1,VIP+0): 11-13 16:43
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my suggestion: 1) check the TAE buffer, is it fresh or not? 2) the electric circute is working well?, I mean the voltage is ok, but the current may not available due to the improper connection. 3) call the technician of the DGGE supplier for solutions 4) refer to the using manual of DGGE for possible answers. |
4楼2009-11-13 16:36:26