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ziyinger

新虫 (初入文坛)

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[交流] 关于做DGGE遇到的问题，费解！！！已有1人参与

最近一直在做DGGE的实验，从前期的提DNA开始，一直在摸索中前进，但是这一个月来，我的实验到了一个瓶颈期，一直找不到原因，在这里跟大家交流一下，看能不能找到时什么原因
1.PCR的结果经过琼脂糖电泳检验，有条带，经优化后条带比较单一；
2.去跑聚丙烯酰胺电泳的时候，出来的一直是这样的胶：只有胶孔处有条亮带，底下的胶是一整片的，什么条带都没有，甚至没有泳道；
3.我拿师兄已经跑过DGGE的pcr结果去跑，还是一样的结果，开始怀疑是药品的问题
4.让四楼师姐做DGGE的时候给带个样，我的pcr结果可以出来条带，还不错；
4用四楼师姐的全套药品，包括她已经配好的胶，刚用过一次（可以做出来）来做DGGE，加了我的pcr结果和师姐已经跑过DGGE剩下的PCR样品一起来做，出来的结果仍然是胶孔处有一亮带，底下的连泳道都没有，跟别说条带了，在这次实验的过程中，师姐一直在旁边指导我的操作，而且仪器师姐两天天刚用过，没问题。
做DGGE差不错一个多月了，前期以为是自己的操作，或者说是条件没有优化好，但做到后来发现不管我怎么优化实验条件，都是一样的结果（只有胶孔有亮带，底下连泳道都没有），但做完第四步骤后确实很受打击，突然发现失去了前进的方向，面对这样的结果不知道从何入手。
本来想放个图片上来的，但好像不太会，就不放上来了。
有做个DGGE的师兄师姐们，能给提点意见，说说自己的想法就最好了，先谢谢大家了。
这两天一直在思考是哪儿出问题了，现在能想到的是电泳是不是根本没跑起来，不然怎么会不往下跑呢，但是pump开了，电压从70V到120V都试过，应该是没有问题的，真的不知道是哪儿出问题了。

[ Last edited by amisking on 2010-4-18 at 21:50 ]

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