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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 环境 » 监测分析 » 【求助】测总糖时，光密度与吸光度可不可以用同一台机器来测？
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jiangfan0323

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】测总糖时，光密度与吸光度可不可以用同一台机器来测？

测总糖的标准曲线，用的硫酸—苯酚法，文献中说测量的是光密度，我们只能测吸光度，但吸光度太大，稀释后发现颜色就不对了，本来原液中感觉颜色剃度蛮好的，但稀释后测得的吸光度线性很差。
       我想请问下测定光密度可不可以用吸光度来代替？还有有没有测多糖好的方法?
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1楼 2009-11-11 08:50:26
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wxzyfx

至尊木虫 (正式写手)
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luhaitao84(金币+1,VIP+0):谢谢提供方法，能再详细点儿嘛？ 11-11 09:33
我这也用类似方法测carbohydrate,不知道跟你的总糖有啥区别。我这是加1ml of 5% (w/v)phenol solution; 5 ml of concentrated sulfuric acid. standard for 10-20 min, then measure its absorbance at 490 nm.

注意量程， 100 mg/l 左右。

不知是不是跟你咨询的方法类似。
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2楼2009-11-11 08:57:37
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jiangfan0323

金虫 (小有名气)
是的，和你一样的，我们用葡萄糖做标准物质，放在沸水中保持15分钟
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3楼2009-11-11 09:03:48
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wxzyfx

至尊木虫 (正式写手)
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luhaitao84(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流！这方法我都没用过！受教了！ 11-12 05:57
那你按上面的方法，认真配试剂。Phenol solution 用酒精配，硫酸就用浓硫酸。另外测量波长是490nm。不要超过浓度范围（100mg/l)。样品浓度太高，稀释样品。我前几天还做过，线性很好。跟其它的比色法一样，吸光度在0-1之间最好。
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4楼2009-11-11 09:10:35
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jiangfan0323

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wxzyfx at 2009-11-11 09:10:
那你按上面的方法，认真配试剂。Phenol solution 用酒精配，硫酸就用浓硫酸。另外测量波长是490nm。不要超过浓度范围（100mg/l)。样品浓度太高，稀释样品。我前几天还做过，线性很好。跟其它的比色法一样，吸光度 ...

我们浓度肯定没有超出范围。现在实验中有几个问题要请教一下：
1，你加浓硫酸之后不要用沸水中保持15min吗？
2、样品你取的是多少毫升？我们加上浓硫酸总共7mL,放在比色皿中，还要进行润洗，就不够了
3、我们测得的吸光度达到0.8多，会不会太大了？
    可以的话，我们加QQ聊吧，我QQ：328011830，谢谢
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5楼2009-11-11 09:25:59
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wxzyfx

至尊木虫 (正式写手)
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luhaitao84(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流！ 11-12 05:58
这是分析方法。 不需要在废水中保持，因为加入硫酸后温度就很高了。
吸光度0.8不是很大。

Carbohydrate concentration
a.        Dilute sample properly if its carbohydrate concentration is higher than 70 mg/L.
b.        Pipette 1 mL of sample to a glass tube.
c.        Add 1 mL of 5% (w/v) phenol solution, mixed.
d.        Quickly add 5 mL of concentrated sulfuric acid.
e.        Mono-, oligo- and polysaccharides are reacted with phenol and concentrated sulfuric acid to form orange color compounds.  Let color developed for about 10-20 minutes and then measure its absorbance at 490 nm against a reagent blank
f.        Calculate sample concentration by comparing its absorbance with standard curve that is made with glucose used as standard carbohydrate
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6楼2009-11-11 09:30:03
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lk1027

新虫 (小有名气)
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luhaitao84(金币+1,VIP+0):鼓励新虫讨论！ 11-12 05:58
当时我测的时候就是测吸光度，也在沸水中放置了15分钟，严格按照标准方法，我觉得主要是当时你做标准曲线时怎样处理，你测定时就怎么处理。如果吸光度太高，可以稀释再测定。
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7楼2009-11-12 00:25:39
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jiangfan0323

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lk1027 at 2009-11-12 00:25:
当时我测的时候就是测吸光度，也在沸水中放置了15分钟，严格按照标准方法，我觉得主要是当时你做标准曲线时怎样处理，你测定时就怎么处理。如果吸光度太高，可以稀释再测定。

标准曲线我已经做好了，还不错。这个不能稀释的，我一开始做的时候就是稀释的，稀释到了25mL，结果就完全没有线性，感觉就是一加水颜色就变了，不是那种稀释后的变化。昨天我测得最大吸光度是1.02，不过线性还很好，我对这个1.02的值很想不通，都超过1了。
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8楼2009-11-12 09:13:30
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wxzyfx

至尊木虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by jiangfan0323 at 2009-11-12 09:13:

标准曲线我已经做好了，还不错。这个不能稀释的，我一开始做的时候就是稀释的，稀释到了25mL，结果就完全没有线性，感觉就是一加水颜色就变了，不是那种稀释后的变化。昨天我测得最大吸光度是1.02，不过线性还很 ...

吸光度为1很正常，只要线性好就行。比色法很多的吸光度上限都在1左右，吸光度太小反而误差更大。
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9楼2009-11-12 10:11:30
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