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浪尖儿男

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教关于包涵体蛋白纯化的问题

最近在纯化一个原核表达的蛋白,但出现了一点问题,想请教一下:
蛋白是包涵体形式的,前面通过6M的盐酸胍溶液已经溶解了,然后用400mM的L-Arg HCl溶液+5mM的GSH和0.5mM的GSSG复性buffer进行了复性,用超滤管浓缩的时候浓缩的就特别慢,上分子筛前高速离心发现有很多沉淀。检测了一下蛋白都在沉淀里,上清里没有目的蛋白了,请问要怎么调整呢?可能是哪里出了问题呢?谢谢大家指点了!!!
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heylixing

铁虫 (正式写手)

使用6M 盐酸胍溶解没问题,复性液也没啥问题。
需要注意的是:通常包涵体蛋白需要通过纯化去除核酸等杂质,这些杂质会干扰复性。

还有一种可能是,蛋白复性不了,这个就没办法了。
2楼2026-06-17 09:42:01
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加油努力ls要用�

新虫 (初入文坛)

您好,我想请问包涵体进行柱上复性的话,复性液中含有精氨酸,但是精氨酸会剥离镍离子?如果进行柱上复性,所需要的buffer配方是什么呀?

发自小木虫IOS客户端
3楼2026-08-22 19:54:58
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加油努力ls要用�

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by heylixing at 2026-06-17 09:42:01
使用6M 盐酸胍溶解没问题,复性液也没啥问题。
需要注意的是:通常包涵体蛋白需要通过纯化去除核酸等杂质,这些杂质会干扰复性。

还有一种可能是,蛋白复性不了,这个就没办法了。

您好,我想请问包涵体进行柱上复性的话,复性液中含有精氨酸,但是精氨酸会剥离镍离子?如果进行柱上复性,所需要的buffer配方是什么呀?

发自小木虫IOS客户端
4楼2026-08-22 19:55:52
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heylixing

铁虫 (正式写手)

???????:
4?: Originally posted by ???????ls???? at 2026-08-22 19:55:52
??????????????????????????????????????к??о???????????????????????????????????????????????buffer?????????
...

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5楼2026-08-23 09:17:11
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