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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请教关于包涵体蛋白纯化的问题
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浪尖儿男

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教关于包涵体蛋白纯化的问题

最近在纯化一个原核表达的蛋白，但出现了一点问题，想请教一下：
蛋白是包涵体形式的，前面通过6M的盐酸胍溶液已经溶解了，然后用400mM的L-Arg HCl溶液+5mM的GSH和0.5mM的GSSG复性buffer进行了复性，用超滤管浓缩的时候浓缩的就特别慢，上分子筛前高速离心发现有很多沉淀。检测了一下蛋白都在沉淀里，上清里没有目的蛋白了，请问要怎么调整呢？可能是哪里出了问题呢？谢谢大家指点了！！！
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1楼 2025-07-01 15:59:14
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heylixing

铁虫 (正式写手)
使用6M 盐酸胍溶解没问题，复性液也没啥问题。
需要注意的是：通常包涵体蛋白需要通过纯化去除核酸等杂质，这些杂质会干扰复性。

还有一种可能是，蛋白复性不了，这个就没办法了。
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2楼2026-06-17 09:42:01
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加油努力ls要用�

新虫 (初入文坛)
您好，我想请问包涵体进行柱上复性的话，复性液中含有精氨酸，但是精氨酸会剥离镍离子？如果进行柱上复性，所需要的buffer配方是什么呀？

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3楼2026-08-22 19:54:58
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加油努力ls要用�

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by heylixing at 2026-06-17 09:42:01
使用6M 盐酸胍溶解没问题，复性液也没啥问题。
需要注意的是：通常包涵体蛋白需要通过纯化去除核酸等杂质，这些杂质会干扰复性。

还有一种可能是，蛋白复性不了，这个就没办法了。

您好，我想请问包涵体进行柱上复性的话，复性液中含有精氨酸，但是精氨酸会剥离镍离子？如果进行柱上复性，所需要的buffer配方是什么呀？

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4楼2026-08-22 19:55:52
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heylixing

铁虫 (正式写手)
???????:
4?: Originally posted by ???????ls???? at 2026-08-22 19:55:52
??????????????????????????????????????к??о???????????????????????????????????????????????buffer?????????
...

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5楼2026-08-23 09:17:11
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