应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 请教关于包涵体蛋白纯化的问题
51/1返回列表
查看: 5169  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者浪尖儿男将赠送您 25 个金币

浪尖儿男

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教关于包涵体蛋白纯化的问题

最近在纯化一个原核表达的蛋白，但出现了一点问题，想请教一下：
蛋白是包涵体形式的，前面通过6M的盐酸胍溶液已经溶解了，然后用400mM的L-Arg HCl溶液+5mM的GSH和0.5mM的GSSG复性buffer进行了复性，用超滤管浓缩的时候浓缩的就特别慢，上分子筛前高速离心发现有很多沉淀。检测了一下蛋白都在沉淀里，上清里没有目的蛋白了，请问要怎么调整呢？可能是哪里出了问题呢？谢谢大家指点了！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2025-07-01 15:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heylixing

铁虫 (正式写手)
使用6M 盐酸胍溶解没问题，复性液也没啥问题。
需要注意的是：通常包涵体蛋白需要通过纯化去除核酸等杂质，这些杂质会干扰复性。

还有一种可能是，蛋白复性不了，这个就没办法了。
赞一下 回复此楼
2楼2026-06-17 09:42:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

加油努力ls要用�

新虫 (初入文坛)
您好，我想请问包涵体进行柱上复性的话，复性液中含有精氨酸，但是精氨酸会剥离镍离子？如果进行柱上复性，所需要的buffer配方是什么呀？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2026-08-22 19:54:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

加油努力ls要用�

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by heylixing at 2026-06-17 09:42:01
使用6M 盐酸胍溶解没问题，复性液也没啥问题。
需要注意的是：通常包涵体蛋白需要通过纯化去除核酸等杂质，这些杂质会干扰复性。

还有一种可能是，蛋白复性不了，这个就没办法了。

您好，我想请问包涵体进行柱上复性的话，复性液中含有精氨酸，但是精氨酸会剥离镍离子？如果进行柱上复性，所需要的buffer配方是什么呀？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2026-08-22 19:55:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heylixing

铁虫 (正式写手)
???????:
4?: Originally posted by ???????ls???? at 2026-08-22 19:55:52
??????????????????????????????????????к??о???????????????????????????????????????????????buffer?????????
...

?????????????????
赞一下 回复此楼
5楼2026-08-23 09:17:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 浪尖儿男 的主题更新
51/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭