24小时热门版块排行榜    

查看: 778  |  回复: 6
当前主题已经存档。

minmin-911

铜虫 (小有名气)

[交流] 蓝白斑不出现

最近做蓝白斑实验,很不顺利  第一次做的时候 PCR产物没割胶回收就直接去连接
,T4连接酶连接4h 转化了 结果我的平板就长了1个白斑 经过验证 发现那个不是我的目的基因
第二次做 把PCR产物都割胶回收纯化了 然后T4连接酶连接大于4h(老板说时间长点好)难道时间长点真的好么?结果蓝白斑都没出现,不知道是哪个地方出了问题   最近很不顺  做实验做的崩溃了  希望大家帮我分析下 这个是什么问题。平板都是一起配的 肯定不是平板的问题 因为第一次长了 然后就是感受态的问题 我的感受态第一次是用的人家的 结果长的不多  第二次感受态是自己做的  结果都没长 难道感受态的问题?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

呵呵 你做实验没有阴性对照么?可以用一个已知的抗性质粒进行转换,这样可以排除是不是感受态的问题嘛,记得下次做实验做对照哦!还有连接的时候记得要使内切酶失活。不行了买试剂盒做嘛,也花不了多少钱,很方便的。
可以用QQ找我……
2楼2009-11-07 11:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxx0914

金虫 (小有名气)

我每次连接都超过16h,一般一晚上,takela的载体,还行,就是有时候感受态做不好
3楼2009-11-07 12:51:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxx0914

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
minmin-911(金币+5,VIP+0): 11-19 10:51
可能是感受态的问题,你摇菌多长时间,不要太长,要不菌活性太低,我刚开始跟你情况差不多,多做几次就好了
4楼2009-11-07 12:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)

做好阴性对照;对于感受态细胞的制备上多下点功夫,我觉得这一点可能性最大。说的严重一点,你的感受态细胞或许都已经死亡了,因为篮板都没有长!!!
见得多爱的多
5楼2009-11-07 14:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)

要不就买点感受态吧,我们实验室感受态都是买的
6楼2009-11-07 14:20:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kwkw

木虫 (著名写手)

连接在4度过夜,这个可能是你的感受态有问题,你用TSS法做感受态100%成功。半年前我跟你一样,后来才知道是感受态的原因,走了很多冤枉路,郁闷啊!
再苦:也别忘记坚持!再烦:也别忘记微笑!再急:也要注意语气!再累:也要爱自己!低调做人,你会一次比一次稳健。高调做事,你会一次比一次优秀!
7楼2009-11-07 15:50:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 minmin-911 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 10/500 2026-08-13 20:42 by hmhminy
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见