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minmin-911

铜虫 (小有名气)

[交流] 蓝白斑不出现

最近做蓝白斑实验,很不顺利  第一次做的时候 PCR产物没割胶回收就直接去连接
,T4连接酶连接4h 转化了 结果我的平板就长了1个白斑 经过验证 发现那个不是我的目的基因
第二次做 把PCR产物都割胶回收纯化了 然后T4连接酶连接大于4h(老板说时间长点好)难道时间长点真的好么?结果蓝白斑都没出现,不知道是哪个地方出了问题   最近很不顺  做实验做的崩溃了  希望大家帮我分析下 这个是什么问题。平板都是一起配的 肯定不是平板的问题 因为第一次长了 然后就是感受态的问题 我的感受态第一次是用的人家的 结果长的不多  第二次感受态是自己做的  结果都没长 难道感受态的问题?
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

呵呵 你做实验没有阴性对照么?可以用一个已知的抗性质粒进行转换,这样可以排除是不是感受态的问题嘛,记得下次做实验做对照哦!还有连接的时候记得要使内切酶失活。不行了买试剂盒做嘛,也花不了多少钱,很方便的。
可以用QQ找我……
2楼2009-11-07 11:57:52
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zxx0914

金虫 (小有名气)

我每次连接都超过16h,一般一晚上,takela的载体,还行,就是有时候感受态做不好
3楼2009-11-07 12:51:43
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zxx0914

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
minmin-911(金币+5,VIP+0): 11-19 10:51
可能是感受态的问题,你摇菌多长时间,不要太长,要不菌活性太低,我刚开始跟你情况差不多,多做几次就好了
4楼2009-11-07 12:52:54
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pidou213

木虫 (正式写手)

做好阴性对照;对于感受态细胞的制备上多下点功夫,我觉得这一点可能性最大。说的严重一点,你的感受态细胞或许都已经死亡了,因为篮板都没有长!!!
见得多爱的多
5楼2009-11-07 14:02:09
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小白3521

金虫 (小有名气)

要不就买点感受态吧,我们实验室感受态都是买的
6楼2009-11-07 14:20:29
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kwkw

木虫 (著名写手)

连接在4度过夜,这个可能是你的感受态有问题,你用TSS法做感受态100%成功。半年前我跟你一样,后来才知道是感受态的原因,走了很多冤枉路,郁闷啊!
再苦:也别忘记坚持!再烦:也别忘记微笑!再急:也要注意语气!再累:也要爱自己!低调做人,你会一次比一次稳健。高调做事,你会一次比一次优秀!
7楼2009-11-07 15:50:48
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