24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 733  |  回复: 6
当前主题已经存档。

minmin-911

铜虫 (小有名气)

[交流] 蓝白斑不出现

最近做蓝白斑实验,很不顺利  第一次做的时候 PCR产物没割胶回收就直接去连接
,T4连接酶连接4h 转化了 结果我的平板就长了1个白斑 经过验证 发现那个不是我的目的基因
第二次做 把PCR产物都割胶回收纯化了 然后T4连接酶连接大于4h(老板说时间长点好)难道时间长点真的好么?结果蓝白斑都没出现,不知道是哪个地方出了问题   最近很不顺  做实验做的崩溃了  希望大家帮我分析下 这个是什么问题。平板都是一起配的 肯定不是平板的问题 因为第一次长了 然后就是感受态的问题 我的感受态第一次是用的人家的 结果长的不多  第二次感受态是自己做的  结果都没长 难道感受态的问题?
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

呵呵 你做实验没有阴性对照么?可以用一个已知的抗性质粒进行转换,这样可以排除是不是感受态的问题嘛,记得下次做实验做对照哦!还有连接的时候记得要使内切酶失活。不行了买试剂盒做嘛,也花不了多少钱,很方便的。
可以用QQ找我……
2楼2009-11-07 11:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxx0914

金虫 (小有名气)

我每次连接都超过16h,一般一晚上,takela的载体,还行,就是有时候感受态做不好
3楼2009-11-07 12:51:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxx0914

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
minmin-911(金币+5,VIP+0): 11-19 10:51
可能是感受态的问题,你摇菌多长时间,不要太长,要不菌活性太低,我刚开始跟你情况差不多,多做几次就好了
4楼2009-11-07 12:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)

做好阴性对照;对于感受态细胞的制备上多下点功夫,我觉得这一点可能性最大。说的严重一点,你的感受态细胞或许都已经死亡了,因为篮板都没有长!!!
见得多爱的多
5楼2009-11-07 14:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)

要不就买点感受态吧,我们实验室感受态都是买的
6楼2009-11-07 14:20:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kwkw

木虫 (著名写手)

连接在4度过夜,这个可能是你的感受态有问题,你用TSS法做感受态100%成功。半年前我跟你一样,后来才知道是感受态的原因,走了很多冤枉路,郁闷啊!
再苦:也别忘记坚持!再烦:也别忘记微笑!再急:也要注意语气!再累:也要爱自己!低调做人,你会一次比一次稳健。高调做事,你会一次比一次优秀!
7楼2009-11-07 15:50:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 minmin-911 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 求博导|生物质基多孔碳/超级电容方向,已有相关成果,寻能源材料/碳材料方向老师 +3 猪猪人Zzz 2026-04-12 3/150 2026-04-17 19:10 by 阳阳阳^_^
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 320求调剂 +4 深郊akm 2026-04-17 4/200 2026-04-17 17:32 by 一切OK
[考研] 恳请有学校收留 +8 柯淮然 2026-04-12 8/400 2026-04-17 09:34 by 猪会飞
[考研] 297,工科调剂? +4 河南农业大学-能 2026-04-14 4/200 2026-04-16 22:52 by wulijun2012
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[考研] 求调剂 +11 小聂爱学习 2026-04-11 15/750 2026-04-15 21:57 by noqvsozv
[考研] 通信工程求调剂!!! +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +43 xaw. 2026-04-11 44/2200 2026-04-15 12:46 by 西北望—风沙
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[考研] 考研求调剂 +6 ban班小七 2026-04-11 6/300 2026-04-14 14:06 by 哆啦A梦只是个梦
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] 0831一轮调剂失败求助 +10 小熊睿睿_s 2026-04-11 10/500 2026-04-12 22:43 by 长弓傲
[考研] 344 材料专业 求调剂211 无地域要求 +8 hualkop 2026-04-11 8/400 2026-04-12 22:24 by fqwang
[考研] 339求调剂 +8 hanwudada 2026-04-11 9/450 2026-04-12 15:36 by laoshidan
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
信息提示
请填处理意见