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汕头大学海洋科学接受调剂
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫

[交流] 请各位做过SOE-PCR的各位大侠不吝赐教!!经确认将奖励50金币或更多!

本人想用SOE-PCR的方法扩增一个78bp的基因,设计了三个引物(P1、P2、P3),其中P1、P3是正常的引物,P2的3‘端与P1的3’端 互补,P2的5‘端与P3的3’端互补部分相同。我P出来的结果大小与产物相同,但是我不加P2也能P出结果来,请问这是为什么?
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梦在路就在!
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gyesang

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 11-10 11:37
雪山飞狐7233(金币+5,VIP+0): 11-20 14:32
本人有做过啊,就是overlapping PCR啊,你引物设计有问题吧,感觉你引物设计的不对,序列就只有78bp,就要做什么啊,定点突变还是缺失突变啊,78bp用不着做PCR啊,直接合成都行。

你确认只是78bp吗?

[ Last edited by gyesang on 2009-11-6 at 09:29 ]
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-11-06 09:16:46
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫

小木虫里面没有人做这方面的吗?
梦在路就在!
2楼2009-11-06 08:46:43
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gyesang

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★ ★ ★ ★ ★
雪山飞狐7233(金币+5,VIP+0): 11-20 14:33
设计SOEPCR一般是 引物 的5‘端互补,不是3’端互补啊
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-11-06 09:31:47
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)

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amisking(金币+2,VIP+0): 11-10 11:37
雪山飞狐7233(金币+10,VIP+0): 11-20 14:33
你这个基因才78bp,完全可以直接合成。一般的公司对<=59bp和>=60bp的引物价格是两个档次,如果你嫌贵,可合成两条短于59bp的引物,这两条引物在3'端互补,5'端就是你的基因两端。加入PCR的原料,把这两条引物退火,即可让它们延伸为79bp的全长基因。注意,如果用Taq polymerase,则会多加一个A。
没有必要用三条引物。
5楼2009-11-06 10:31:08
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