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lllk2008

木虫 (小有名气)

[交流] 请教下无菌洗涤收集菌体和细菌计数

前体,都是细菌。
   1,关于洗涤菌体时的无菌操作:
    有些文献里在进行试验时,需要将细菌增殖以后,离心收集并用灭菌的缓冲液洗涤残余培养液再加入到反应体系,这个过程是如何操作保证无菌的呢?难道是事先将离心管灭菌,在超净台内加入菌液,再移到外面用天平配平后离心,再转入超净台倒去上清液加入新的缓冲液?有这么复杂么?
  2,接上个实验操作,在收集菌体后加入反应体系之前,需要知道菌体密度,这个时候如何比较方便地确定菌体浓度?我看到的文献常用吖啶橙染色后荧光显微镜下计数,还有用DAPI的,但是需要那种特别的滤膜和荧光的激发块,没有查到国内有用这个方法的,还有就是普通的CFU法,但是这个精度和稀释倍数把握以及操作均一度有关,而且耗时,且准确度差。有过来人指点下这两个方法的操作么?或者还有更好的办法。
PS,需要知道浓度的细菌是经离心收集洗涤后悬浮在缓冲液中的细菌。
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lllk2008

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-28 22:15:

1、确实像楼主说的那样,需要先离心再用灭菌的缓冲液洗涤两次(不需要配平,因为离心的时候肯定是低速离心,没有太大关系,差不多配平就行了),再加入到反应体系中。这似乎不复杂吧?
2、测下菌液的OD值不就行 ...

关键是,我还需要利用收集的菌体做OD,太浪费了啊,而且OD值还是得对应观测的菌体浓度啊
4楼2009-10-29 09:28:39
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
lllk2008(金币+2,VIP+0): 10-29 09:28
引用回帖:
Originally posted by lllk2008 at 2009-10-28 18:35:
前体,都是细菌。
   1,关于洗涤菌体时的无菌操作:
    有些文献里在进行试验时,需要将细菌增殖以后,离心收集并用灭菌的缓冲液洗涤残余培养液再加入到反应体系,这个过程是如何操作保证无菌的呢?难道是事先 ...

1、确实像楼主说的那样,需要先离心再用灭菌的缓冲液洗涤两次(不需要配平,因为离心的时候肯定是低速离心,没有太大关系,差不多配平就行了),再加入到反应体系中。这似乎不复杂吧?
2、测下菌液的OD值不就行了吗?
2楼2009-10-28 22:15:40
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nankou2008

铁杆木虫 (著名写手)

肥南瓜

测菌密度 OD用的比较多吧
湖深而静溪浅而鸣
3楼2009-10-29 08:35:37
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by lllk2008 at 2009-10-29 09:28:

关键是,我还需要利用收集的菌体做OD,太浪费了啊,而且OD值还是得对应观测的菌体浓度啊

你的实验需要的菌体量很多吗?你各取1ml菌液,一管离掉菌体作对照,另一管就可以测OD了啊!
5楼2009-10-29 13:49:52
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