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lllk2008木虫 (小有名气)
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请教下无菌洗涤收集菌体和细菌计数
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前体,都是细菌。 1,关于洗涤菌体时的无菌操作: 有些文献里在进行试验时,需要将细菌增殖以后,离心收集并用灭菌的缓冲液洗涤残余培养液再加入到反应体系,这个过程是如何操作保证无菌的呢?难道是事先将离心管灭菌,在超净台内加入菌液,再移到外面用天平配平后离心,再转入超净台倒去上清液加入新的缓冲液?有这么复杂么? 2,接上个实验操作,在收集菌体后加入反应体系之前,需要知道菌体密度,这个时候如何比较方便地确定菌体浓度?我看到的文献常用吖啶橙染色后荧光显微镜下计数,还有用DAPI的,但是需要那种特别的滤膜和荧光的激发块,没有查到国内有用这个方法的,还有就是普通的CFU法,但是这个精度和稀释倍数把握以及操作均一度有关,而且耗时,且准确度差。有过来人指点下这两个方法的操作么?或者还有更好的办法。 PS,需要知道浓度的细菌是经离心收集洗涤后悬浮在缓冲液中的细菌。 |
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