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lllk2008木虫 (小有名气)
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[交流]
请教下无菌洗涤收集菌体和细菌计数
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前体，都是细菌。 1，关于洗涤菌体时的无菌操作： 有些文献里在进行试验时，需要将细菌增殖以后，离心收集并用灭菌的缓冲液洗涤残余培养液再加入到反应体系，这个过程是如何操作保证无菌的呢？难道是事先将离心管灭菌，在超净台内加入菌液，再移到外面用天平配平后离心，再转入超净台倒去上清液加入新的缓冲液？有这么复杂么？ 2，接上个实验操作，在收集菌体后加入反应体系之前，需要知道菌体密度，这个时候如何比较方便地确定菌体浓度？我看到的文献常用吖啶橙染色后荧光显微镜下计数，还有用DAPI的，但是需要那种特别的滤膜和荧光的激发块，没有查到国内有用这个方法的，还有就是普通的CFU法，但是这个精度和稀释倍数把握以及操作均一度有关，而且耗时，且准确度差。有过来人指点下这两个方法的操作么？或者还有更好的办法。 PS，需要知道浓度的细菌是经离心收集洗涤后悬浮在缓冲液中的细菌。 |
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