Znn3bq.jpeg
查看: 707  |  回复: 4
当前主题已经存档。

lllk2008

木虫 (小有名气)

[交流] 请教下无菌洗涤收集菌体和细菌计数

前体,都是细菌。
   1,关于洗涤菌体时的无菌操作:
    有些文献里在进行试验时,需要将细菌增殖以后,离心收集并用灭菌的缓冲液洗涤残余培养液再加入到反应体系,这个过程是如何操作保证无菌的呢?难道是事先将离心管灭菌,在超净台内加入菌液,再移到外面用天平配平后离心,再转入超净台倒去上清液加入新的缓冲液?有这么复杂么?
  2,接上个实验操作,在收集菌体后加入反应体系之前,需要知道菌体密度,这个时候如何比较方便地确定菌体浓度?我看到的文献常用吖啶橙染色后荧光显微镜下计数,还有用DAPI的,但是需要那种特别的滤膜和荧光的激发块,没有查到国内有用这个方法的,还有就是普通的CFU法,但是这个精度和稀释倍数把握以及操作均一度有关,而且耗时,且准确度差。有过来人指点下这两个方法的操作么?或者还有更好的办法。
PS,需要知道浓度的细菌是经离心收集洗涤后悬浮在缓冲液中的细菌。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
lllk2008(金币+2,VIP+0): 10-29 09:28
引用回帖:
Originally posted by lllk2008 at 2009-10-28 18:35:
前体,都是细菌。
   1,关于洗涤菌体时的无菌操作:
    有些文献里在进行试验时,需要将细菌增殖以后,离心收集并用灭菌的缓冲液洗涤残余培养液再加入到反应体系,这个过程是如何操作保证无菌的呢?难道是事先 ...

1、确实像楼主说的那样,需要先离心再用灭菌的缓冲液洗涤两次(不需要配平,因为离心的时候肯定是低速离心,没有太大关系,差不多配平就行了),再加入到反应体系中。这似乎不复杂吧?
2、测下菌液的OD值不就行了吗?
2楼2009-10-28 22:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nankou2008

铁杆木虫 (著名写手)

肥南瓜

测菌密度 OD用的比较多吧
湖深而静溪浅而鸣
3楼2009-10-29 08:35:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lllk2008

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-28 22:15:

1、确实像楼主说的那样,需要先离心再用灭菌的缓冲液洗涤两次(不需要配平,因为离心的时候肯定是低速离心,没有太大关系,差不多配平就行了),再加入到反应体系中。这似乎不复杂吧?
2、测下菌液的OD值不就行 ...

关键是,我还需要利用收集的菌体做OD,太浪费了啊,而且OD值还是得对应观测的菌体浓度啊
4楼2009-10-29 09:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by lllk2008 at 2009-10-29 09:28:

关键是,我还需要利用收集的菌体做OD,太浪费了啊,而且OD值还是得对应观测的菌体浓度啊

你的实验需要的菌体量很多吗?你各取1ml菌液,一管离掉菌体作对照,另一管就可以测OD了啊!
5楼2009-10-29 13:49:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lllk2008 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 急需审稿人!!! +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 一志愿A区211,22408 321求调剂 +7 随心所欲☆ 2026-04-15 8/400 2026-04-21 08:22 by Equinoxhua
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 一志愿中科大材料与化工,353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[论文投稿] 期刊推荐 +3 材料研究生 2026-04-15 5/250 2026-04-20 16:02 by 豆豆7758
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 294求调剂 +15 淡然654321 2026-04-15 15/750 2026-04-19 08:20 by cuisz
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 一志愿沪9,生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
信息提示
请填处理意见