应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教下无菌洗涤收集菌体和细菌计数
51/1返回列表
查看: 667  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

lllk2008

木虫 (小有名气)

[交流] 请教下无菌洗涤收集菌体和细菌计数

前体，都是细菌。
   1，关于洗涤菌体时的无菌操作：
    有些文献里在进行试验时，需要将细菌增殖以后，离心收集并用灭菌的缓冲液洗涤残余培养液再加入到反应体系，这个过程是如何操作保证无菌的呢？难道是事先将离心管灭菌，在超净台内加入菌液，再移到外面用天平配平后离心，再转入超净台倒去上清液加入新的缓冲液？有这么复杂么？
  2，接上个实验操作，在收集菌体后加入反应体系之前，需要知道菌体密度，这个时候如何比较方便地确定菌体浓度？我看到的文献常用吖啶橙染色后荧光显微镜下计数，还有用DAPI的，但是需要那种特别的滤膜和荧光的激发块，没有查到国内有用这个方法的，还有就是普通的CFU法，但是这个精度和稀释倍数把握以及操作均一度有关，而且耗时，且准确度差。有过来人指点下这两个方法的操作么？或者还有更好的办法。
PS，需要知道浓度的细菌是经离心收集洗涤后悬浮在缓冲液中的细菌。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-10-28 18:35:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
lllk2008(金币+2,VIP+0): 10-29 09:28
引用回帖:
Originally posted by lllk2008 at 2009-10-28 18:35:
前体，都是细菌。
   1，关于洗涤菌体时的无菌操作：
    有些文献里在进行试验时，需要将细菌增殖以后，离心收集并用灭菌的缓冲液洗涤残余培养液再加入到反应体系，这个过程是如何操作保证无菌的呢？难道是事先 ...

1、确实像楼主说的那样，需要先离心再用灭菌的缓冲液洗涤两次（不需要配平，因为离心的时候肯定是低速离心，没有太大关系，差不多配平就行了），再加入到反应体系中。这似乎不复杂吧？
2、测下菌液的OD值不就行了吗？
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2009-10-28 22:15:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nankou2008

铁杆木虫 (著名写手)

肥南瓜
测菌密度 OD用的比较多吧
赞一下 回复此楼
湖深而静溪浅而鸣
3楼2009-10-29 08:35:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lllk2008

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-28 22:15:

1、确实像楼主说的那样，需要先离心再用灭菌的缓冲液洗涤两次（不需要配平，因为离心的时候肯定是低速离心，没有太大关系，差不多配平就行了），再加入到反应体系中。这似乎不复杂吧？
2、测下菌液的OD值不就行 ...

关键是，我还需要利用收集的菌体做OD，太浪费了啊，而且OD值还是得对应观测的菌体浓度啊
赞一下 回复此楼
4楼2009-10-29 09:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lllk2008 at 2009-10-29 09:28:

关键是，我还需要利用收集的菌体做OD，太浪费了啊，而且OD值还是得对应观测的菌体浓度啊

你的实验需要的菌体量很多吗？你各取1ml菌液，一管离掉菌体作对照，另一管就可以测OD了啊！
赞一下 回复此楼
5楼2009-10-29 13:49:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lllk2008 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +6 墨墨漠 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:25 by Brydon
[考研] 求调剂材料学硕080500，总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 070300化学求调剂 +5 苑豆豆 2026-03-20 5/250 2026-03-23 09:39 by guoliang1816
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +4 niko- 2026-03-22 4/200 2026-03-23 07:56 by Iveryant
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +6 十三加油 2026-03-21 6/300 2026-03-22 17:00 by i_cooler
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭