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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于双酶切
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yoyoyehan

[交流] 关于双酶切

PET28载体双酶切后电泳，怎么就看见一个条带呢，大概4500多bp，酶切37度，5h。
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1楼 2009-10-27 17:27:46
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xiaoai8039

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1从工具书中（takara目录）查你选择的两个酶能否同时进行双酶切？效率高不高？
2同时酶切或分别酶切的最适条件要查清楚，如温度、buffer，另外注意分别酶切时，要使作用后的酶失活。
3可能两个酶切位点间距太小，导致一条带（几十个碱基之内）观察不到或者跑出视野。
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4楼2009-10-27 19:16:29
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用的什么酶？如果都在多克隆位点处，那么切下的片段太小了，琼脂糖电泳不可能看见这么小的片段的~
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生命的海洋里，我是蓝色的一滴
2楼2009-10-27 17:56:38
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
你用的是什么酶切的啊，楼主把所用酶告诉大伙啊
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-10-27 18:47:05
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yoyoyehan

引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-10-27 18:47:
你用的是什么酶切的啊，楼主把所用酶告诉大伙啊

TaKaRa的XboI  和 XhoI  内切酶，
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5楼2009-10-28 09:00:31
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