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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于双酶切
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yoyoyehan

[交流] 关于双酶切

PET28载体双酶切后电泳，怎么就看见一个条带呢，大概4500多bp，酶切37度，5h。
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1楼 2009-10-27 17:27:46
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★
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你用的什么酶？如果都在多克隆位点处，那么切下的片段太小了，琼脂糖电泳不可能看见这么小的片段的~
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生命的海洋里，我是蓝色的一滴
2楼2009-10-27 17:56:38
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
你用的是什么酶切的啊，楼主把所用酶告诉大伙啊
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-10-27 18:47:05
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xiaoai8039

铜虫 (小有名气)
★
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1从工具书中（takara目录）查你选择的两个酶能否同时进行双酶切？效率高不高？
2同时酶切或分别酶切的最适条件要查清楚，如温度、buffer，另外注意分别酶切时，要使作用后的酶失活。
3可能两个酶切位点间距太小，导致一条带（几十个碱基之内）观察不到或者跑出视野。
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4楼2009-10-27 19:16:29
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yoyoyehan

引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-10-27 18:47:
你用的是什么酶切的啊，楼主把所用酶告诉大伙啊

TaKaRa的XboI  和 XhoI  内切酶，
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5楼2009-10-28 09:00:31
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
同意二楼
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金币是赌出来的
6楼2009-10-28 11:56:57
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
★
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不是XboI 是XbalI 吧，两个酶切位点距离太近，跑时间长了就看不见了，建议你跑一会就看看电泳，有可能是可以看见的！
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平和悦衲！
7楼2009-10-28 12:19:45
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