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fengyue518

铜虫 (初入文坛)

[求助] 各位大神,求助大肠杆菌发酵补料C/N比,诱导后什么时候开始补料问题已有1人参与

大肠杆菌(工程菌)发酵: 10L罐发酵,配料5L,OD600值10左右开始IPTG诱导(4h左右),3h溶氧开始反弹补糖,诱导后开始补氮源(蛋白胨,酵母膏);糖联动DO,氮源匀速补料,24h放罐。
问题:1.湿菌体含量只有6%左右,多少算正常?
        2.氮源的补料时机?补料C/N?
        3.诱导时机是不是太早了?什么时候诱导合适?
        4.补糖联动DO还是PH更合适?
麻烦各位大神,谢谢!!

@天使托 发自小木虫Android客户端
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死磕人

金虫 (小有名气)

高级发酵工程师

你们是什么性质的单位?我们可以给提供技术服务的
好好学习,天天向上!
2楼2024-09-23 10:27:17
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后来就算

金虫 (小有名气)

接种量多少?
什么时候积分不是零啊
3楼2024-09-24 08:10:48
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fengyue518

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 后来就算 at 2024-09-24 08:10:48
接种量多少?

每个罐子接一支试管斜面

发自小木虫Android客户端
4楼2024-09-25 22:00:51
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草木贲华

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1.湿菌体含量跟你下罐时候的OD600有关;OD600能长到多少基本跟你菌株类型和培养基有关,但是表达蛋白的菌株你可以起码把OD600定在100才比较正常;
2.3 h溶氧就开始上基础培养基里C源应该太少了;
3. 发酵中后期产酸还是产碱?
5楼2024-10-09 14:18:45
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fengyue518

铜虫 (初入文坛)

3h开始溶氧、ph就开始上升,开始补糖。补糖一停止ph,溶氧就开始上升。最近做几批OD值都是70多,现在比较迷惑的是补氮量和补氮时机

发自小木虫Android客户端
6楼2024-10-14 08:43:22
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草木贲华

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by fengyue518 at 2024-10-14 08:43:22
3h开始溶氧、ph就开始上升,开始补糖。补糖一停止ph,溶氧就开始上升。最近做几批OD值都是70多,现在比较迷惑的是补氮量和补氮时机

DO和pH上升是因为基础培养基里C源消耗完了,上升正常;补料停止pH和DO又继续上升就表示补C没有过量,也是正常的补料情况。听你的意思是C/N分开补的,我是建议一起补,摸索出来一个C/N比例然后固定,毕竟补C不足或者过量都有直观地表征,但是补N没有。固定各时段的补料速度,通过转速和通气量控制DO是比较常规的操作。最后表达蛋白的菌株的话,如果是BL21起始你可以以发酵30+h OD600≥130下罐为参考,70左右一般是克隆菌株,表达菌株生长能力会比克隆菌株强不少
7楼2024-10-15 08:37:43
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)

不知道您做的产品和发酵配方,按照您的描述,感觉不用太在意碳氮比,可以把氮源全部放入基础料中,只进行碳源补料;还有就是补糖,pH值和溶氧回升之后可以稍等一段时间,观察pH和溶氧的上升幅度,有时候两者都回升后,溶氧可能再次下降,此时可能在代谢部分中间产物
越努力,越幸运
8楼2024-11-11 17:09:00
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