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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 各位大神，求助大肠杆菌发酵补料C/N比，诱导后什么时候开始补料问题
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fengyue518

铜虫 (初入文坛)

[求助] 各位大神，求助大肠杆菌发酵补料C/N比，诱导后什么时候开始补料问题 已有1人参与

大肠杆菌（工程菌）发酵: 10L罐发酵，配料5L，OD600值10左右开始IPTG诱导（4h左右），3h溶氧开始反弹补糖，诱导后开始补氮源（蛋白胨，酵母膏）；糖联动DO，氮源匀速补料，24h放罐。
问题:1.湿菌体含量只有6%左右，多少算正常？
        2.氮源的补料时机？补料C/N？
        3.诱导时机是不是太早了？什么时候诱导合适？
        4.补糖联动DO还是PH更合适？
麻烦各位大神，谢谢！！

@天使托 发自小木虫Android客户端
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1楼 2024-09-21 16:19:18
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死磕人

金虫 (小有名气)

高级发酵工程师
你们是什么性质的单位？我们可以给提供技术服务的
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好好学习，天天向上！
2楼2024-09-23 10:27:17
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后来就算

金虫 (小有名气)
接种量多少？
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什么时候积分不是零啊
3楼2024-09-24 08:10:48
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fengyue518

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 后来就算 at 2024-09-24 08:10:48
接种量多少？

每个罐子接一支试管斜面

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4楼2024-09-25 22:00:51
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草木贲华

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1.湿菌体含量跟你下罐时候的OD600有关；OD600能长到多少基本跟你菌株类型和培养基有关，但是表达蛋白的菌株你可以起码把OD600定在100才比较正常；
2.3 h溶氧就开始上基础培养基里C源应该太少了；
3. 发酵中后期产酸还是产碱？
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5楼2024-10-09 14:18:45
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fengyue518

铜虫 (初入文坛)
3h开始溶氧、ph就开始上升，开始补糖。补糖一停止ph，溶氧就开始上升。最近做几批OD值都是70多，现在比较迷惑的是补氮量和补氮时机

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6楼2024-10-14 08:43:22
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草木贲华

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fengyue518 at 2024-10-14 08:43:22
3h开始溶氧、ph就开始上升，开始补糖。补糖一停止ph，溶氧就开始上升。最近做几批OD值都是70多，现在比较迷惑的是补氮量和补氮时机

DO和pH上升是因为基础培养基里C源消耗完了，上升正常；补料停止pH和DO又继续上升就表示补C没有过量，也是正常的补料情况。听你的意思是C/N分开补的，我是建议一起补，摸索出来一个C/N比例然后固定，毕竟补C不足或者过量都有直观地表征，但是补N没有。固定各时段的补料速度，通过转速和通气量控制DO是比较常规的操作。最后表达蛋白的菌株的话，如果是BL21起始你可以以发酵30+h OD600≥130下罐为参考，70左右一般是克隆菌株，表达菌株生长能力会比克隆菌株强不少
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7楼2024-10-15 08:37:43
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Mr德古拉

木虫 (正式写手)
不知道您做的产品和发酵配方，按照您的描述，感觉不用太在意碳氮比，可以把氮源全部放入基础料中，只进行碳源补料；还有就是补糖，pH值和溶氧回升之后可以稍等一段时间，观察pH和溶氧的上升幅度，有时候两者都回升后，溶氧可能再次下降，此时可能在代谢部分中间产物
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越努力，越幸运
8楼2024-11-11 17:09:00
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