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fengyue518

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 各位大神，求助大肠杆菌发酵补料C/N比，诱导后什么时候开始补料问题已有1人参与

大肠杆菌（工程菌）发酵: 10L罐发酵，配料5L，OD600值10左右开始IPTG诱导（4h左右），3h溶氧开始反弹补糖，诱导后开始补氮源（蛋白胨，酵母膏）；糖联动DO，氮源匀速补料，24h放罐。
问题:1.湿菌体含量只有6%左右，多少算正常？
      2.氮源的补料时机？补料C/N？
      3.诱导时机是不是太早了？什么时候诱导合适？
      4.补糖联动DO还是PH更合适？
麻烦各位大神，谢谢！！

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草木贲华

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by fengyue518 at 2024-10-14 08:43:22
3h开始溶氧、ph就开始上升，开始补糖。补糖一停止ph，溶氧就开始上升。最近做几批OD值都是70多，现在比较迷惑的是补氮量和补氮时机

DO和pH上升是因为基础培养基里C源消耗完了，上升正常；补料停止pH和DO又继续上升就表示补C没有过量，也是正常的补料情况。听你的意思是C/N分开补的，我是建议一起补，摸索出来一个C/N比例然后固定，毕竟补C不足或者过量都有直观地表征，但是补N没有。固定各时段的补料速度，通过转速和通气量控制DO是比较常规的操作。最后表达蛋白的菌株的话，如果是BL21起始你可以以发酵30+h OD600≥130下罐为参考，70左右一般是克隆菌株，表达菌株生长能力会比克隆菌株强不少