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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于His标签蛋白不结合镍柱的问题，有没有有经验的大神来指点一二，多谢
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yabxxh

木虫 (正式写手)

[求助] 关于His标签蛋白不结合镍柱的问题，有没有有经验的大神来指点一二，多谢

最近做一个蛋白，N端就是M+6xHis+目的蛋白，结构很简单。
表达量不错，可溶表达也很好，但是遇到一个非常奇怪的问题，就是目的蛋白始终无法结合镍柱，洗脱液中无法检测到目的蛋白。电泳图上可以看出，目的蛋白全部穿出，载体部分经过测序，没有问题。
所以，有没有遇到过这个问题的同学，来交流一下，后面都是怎么解决的。
目前打算前面增加His数量到8,10个，或者在His后面加一个linker，
请各位不吝赐教。
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1楼 2024-06-24 16:45:46
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yabxxh

木虫 (正式写手)
补充一点，这个结构用于很多蛋白，都没有问题;
唯独这一个蛋白，死活就不结合镍柱。
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2楼2024-06-24 17:52:49
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FZX_2024

新虫 (正式写手)
结合buffer调整下PH值

发自小木虫Android客户端
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生物大分子修饰
3楼2024-06-24 18:22:28
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yabxxh

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fysh2023 at 2024-06-24 18:22:28
结合buffer调整下PH值

pH看过了，远离pi，你的意思是给buffer拉一个pH梯度？原来有这样处理过吗
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4楼2024-06-25 15:05:44
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yabxxh

木虫 (正式写手)
蛋白等电点9.18，使用的buffer ph7.5
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5楼2024-06-25 15:07:42
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yabxxh

木虫 (正式写手)
这大神们都毕业了，不回来了吗？
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6楼2024-06-27 08:55:23
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yabxxh

木虫 (正式写手)
我勒个去，还没有人来吗，
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7楼2024-07-05 16:20:51
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yabxxh

木虫 (正式写手)
补充一下：
用尿素溶了之后上镍柱，依然不挂柱，说明这个His标签本来就有问题。
有兄弟遇到过吗，加长H的个数能不能有所改观
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8楼2024-07-05 16:22:30
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
可能是表达错位了

发自小木虫IOS客户端
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9楼2025-01-24 15:19:53
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