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yabxxh

木虫 (正式写手)

[求助] 关于His标签蛋白不结合镍柱的问题,有没有有经验的大神来指点一二,多谢

最近做一个蛋白,N端就是M+6xHis+目的蛋白,结构很简单。
表达量不错,可溶表达也很好,但是遇到一个非常奇怪的问题,就是目的蛋白始终无法结合镍柱,洗脱液中无法检测到目的蛋白。电泳图上可以看出,目的蛋白全部穿出,载体部分经过测序,没有问题。
所以,有没有遇到过这个问题的同学,来交流一下,后面都是怎么解决的。
目前打算前面增加His数量到8,10个,或者在His后面加一个linker,
请各位不吝赐教。
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yabxxh

木虫 (正式写手)

补充一点,这个结构用于很多蛋白,都没有问题;
唯独这一个蛋白,死活就不结合镍柱。
2楼2024-06-24 17:52:49
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FZX_2024

新虫 (正式写手)

生物大分子修饰
3楼2024-06-24 18:22:28
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yabxxh

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fysh2023 at 2024-06-24 18:22:28
结合buffer调整下PH值

pH看过了,远离pi,你的意思是给buffer拉一个pH梯度?原来有这样处理过吗
4楼2024-06-25 15:05:44
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yabxxh

木虫 (正式写手)

蛋白等电点9.18,使用的buffer ph7.5
5楼2024-06-25 15:07:42
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yabxxh

木虫 (正式写手)

这大神们都毕业了,不回来了吗?
6楼2024-06-27 08:55:23
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yabxxh

木虫 (正式写手)

我勒个去,还没有人来吗,
7楼2024-07-05 16:20:51
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yabxxh

木虫 (正式写手)

补充一下:
用尿素溶了之后上镍柱,依然不挂柱,说明这个His标签本来就有问题。
有兄弟遇到过吗,加长H的个数能不能有所改观
8楼2024-07-05 16:22:30
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


9楼2025-01-24 15:19:53
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